免疫管理论文第1篇

幽门螺杆菌（Hp）作为慢性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃癌、胃淋巴瘤发生发展中的重要致病因素已为大量研究证实，其致病机理包括Hp的尿素酶、蛋白酶、脂酶、磷脂酶A、趋化因子及细胞空泡毒素（VacA）等直接致病，也包括Hp引起宿主的炎症及免疫应答致病[1]。本文主要就Hp菌苗与宿主的免疫应答及相关问题的研究进展作一简要综述。

hp与菌苗研究

Hp感染是世界范围的，而且是终身感染。新近研究显示，口服菌苗可诱导针对Hp感染的保护性免疫，并且菌苗可治愈已存在的HP感染性病变，从而表明用菌苗治疗Hp感染是可行的[2]。用霍乱毒素（CT）B亚单位或大肠杆菌不耐热毒素（LT）作粘膜佐剂的Hp抗原诱导免疫已获成功，即Hp对宿主自然免疫应答的抵抗能被瓦解。成功用作Hp菌苗的抗原有Hp细胞裂解产物、尿素酶、VacA、热休克蛋白和过氧化物酶等。免疫学研究及动物模型也证实口服免疫不仅可以预防而且能治愈Hp感染，并且鼻内及结肠免疫均可引起胃粘膜的免疫保护[3]。新近Ghiara等用重组VacA或细胞毒素相关蛋白（CagA）作抗原，减毒的大肠杆菌LT突变体作为佐剂，成功地根除了小鼠模型中的慢性Hp感染，并证明该治疗性菌苗对Hp再感染有同样有效的免疫防御作用[4]。总之Hp作为非侵入性细菌，定居于胃粘膜表面，可引起机体的免疫及炎症反应。面对机体强大的免疫应答，Hp仍能继续生存并致病，其机理尚不清楚。免疫效应分子必须进入胃粘膜表面，才能中和和杀伤Hp。目前认为该作用与胃分泌液中出现抗Hp特异性分泌型IgA抗体相关。这种抗体也在感染的动物及人体中出现，所以细胞免疫效应在防御或治疗Hp感染中的作用仍需进一步研究。另外，了解Hp逃逸免疫效应分子的机理以及Hp菌苗诱导宿主的免疫保护及免疫损伤的机理，将为更有效的菌苗筛选提供可能。最近报道对Hp感染的易感性与小鼠中主要组织相容性复合体（MHC）位点直接相关，这是否适用于菌苗设计也需进一步研究证实[5]。

hp与宿主免疫

Hp诱导宿主免疫应答的途径，目前认为包括Hp可溶性产物的被动吸收，上皮细胞直接内吞细菌抗原，抗原通过被破坏的胃上皮进入组织激发机体的免疫应答[6]。粘膜对不同Hp免疫应答的差异是决定病变后果的重要因素。其中包括B细胞及相应的IgG、IgM的体液免疫应答，以及在Hp感染相关慢性活动性胃炎病变局部出现T淋巴细胞浸润的细胞免疫应答[1]。

Hp与体液免疫

实际上所有Hp感染慢性胃炎病人胃粘膜中均有针对Hp的特异性IgA出现，而IgM应答一般只发现于Hp感染急性期的胃粘膜局部。产生IgG（特别是IgG1）的浆细胞，在慢性胃炎中明显增加。在胃十二指肠粘膜局部证明有针对Hp感染的特异性IgG应答。粘膜表面分泌型IgA的出现对于抑制细菌抗原的摄取、阻止Hp的粘附和移动以及中和毒素都非常重要，即IgA在Hp感染中起保护性免疫作用。另外，由于IgA不能有效地激活补体，从而在阻滞Hp特异性IgG介导的补体活化及相关的中性粒细胞活化炎症及介质释放中起重要作用。Hp特异性IgE抗体在感染病人的血清中同样存在，但依赖Hp特异性IgE的肥大细胞释放组胺是否在胃粘膜病变中起作用尚不清楚[6]。

Hp与细胞免疫

针对Hp特异性T细胞也出现于Hp感染病人的胃粘膜中，其中CD45RO+T细胞在Hp感染相关的慢性胃炎病人的胃粘膜中明显增加。分泌γ干扰素而不是白细胞介素4（IL-4）的T细胞在病变局部的浸润也证实Hp诱导的特异性免疫应答以Th1型应答为主。Hp抗原特异性T淋巴细胞应答，不仅参与调节针对Hp的体液免疫应答，而且参与调节胃粘膜上皮中与粘膜防御及抗原呈相关的关键分子的表达[6]。新近研究发现，Hp诱导的抗原特异性T淋巴细胞以辅T淋巴细胞为主，包括Th1及Th2细胞。其作用包括两个方面：增强炎症反应及减少Hp在胃粘膜表面生存。未免疫小鼠感染Hp主要诱发Th1型应答，通过增加γ干扰素分泌而增强胃粘膜损伤性的炎症反应。相反，Hp菌苗抗原免疫后的小鼠感染Hp既诱发Th1型应答，又诱发Th2型应答。Th2型应答通过增加IgG1抗体、IL-4和IL-5的产生而减少Hp在胃粘膜表面的生存，起免疫保护作用。Hp及其菌苗诱导Th1和Th2细胞的作用共存，即增强炎症反应的损伤性作用及减少Hp在胃粘膜表面生存的免疫保护作用同时存在。Hp感染诱导的应答以Th1型为主，即以炎症性损伤为主；而疫苗诱导的应答以Th2型为主，即以免疫保护为主。中和γ干扰素可阻断Th1型免疫应答，减轻Hp的致病作用，及增强Th2细胞在疫苗免疫保护中的作用，从而达到治疗目的[7]。

hp诱导的自然杀伤（NK）细胞在宿主的防御及炎症反应中起重要作用。外周血淋巴细胞与Hp的相互作用诱导非MHC限制的NK细胞活化并分泌γ干扰素，NK细胞的活化及γ干扰素的分泌对于激活巨噬细胞及促进Th1型抗原特异性T细胞应答均非常重要。另外，作为NK细胞的活化因子，IL-12可由Hp刺激的中性粒细胞及单核细胞产生[6]。

Hp与自制免疫

一些Hp中脂多糖（LPS）的O-特异性多糖链抗原区结构与岩藻糖化的Lewisy血型抗原类似，而另一些菌株与LewisY血型抗原类似[8]。一些抗Hp的单克隆抗体与人和鼠的胃上皮细胞存在交叉反应。这种交叉反应与LPS模拟或Hp58kDa蛋白相关。该58kDa蛋白属于热休克蛋白（hsp60）家族成员，与人hsp60有高度同源性。而在T细胞水平上不存在宿主与细菌hsp60的交叉反应。根除Hp感染的结果表明无论是抗LPS决定簇还是hsp60的自身免疫应答，对胃粘膜的完整性没有长期的破坏作用[6]。Ko等用214种抗Hp的单克隆抗体检测其与人组织交叉反应能力，结果发现71种抗体与胃粘膜中Hp起反应，25种抗体与胃上皮细胞反应，8种抗体与十二指肠上皮细胞反应。与胃上皮细胞起交叉反应的抗体包括抗Hp尿素酶抗体、抗鞭毛抗体、抗LPS抗体及抗热休克蛋白抗体。提示Hp引起的宿主自身免疫应答涉及多种Hp成分[9]。Faller等发现Hp感染与抗胃小凹上皮细胞膜及壁细胞中小管结构的自身抗体明显相关[10]。另外新近研究发现，HpLPS表达人血型抗原并非固定不变，而是呈现期相性改变，包括三种类型变异体：第一种是表达Lewisx型抗原的LPS失去α1，3-岩藻糖，变为I抗原，这种改变是可兼管的；第二种是LPS的Lewisx抗原失去聚合主链成为表达单体的LewisY抗原；第三种是LPSlewisY抗原获得α1，2-岩糖，使LewisX和LewisY抗原的表达均被增强。表明同一Hp菌珠存在不同的Lewis血型抗原[11]。HPLPS的O-多糖抗原与Lewis血型抗原这种类似结构是否有种于Hp生存、引起宿主的自身免疫应答、促进Hp粘附及增强炎症反应尚需进一步研究证实[8]。

Hp与免疫抑制

有研究提出Hp直接诱导宿主的免疫调节，使针对Hp的有效免疫不能发生。Hp胞浆中一种非细胞毒素蛋白可以抑制外周血单个核细胞增殖，该蛋白分别抑制单核细胞表面CD14及T细胞表面CD25分子的表达[12]。Hp诱导的免疫调节对免疫介导的粘膜损伤有一定的保护作用，但同时也导致Hp感染的长期持续存在。尽管Hp能刺激宿主免疫系统产生抗体及细胞因子，但是Hp亦产生一种介导抑制人细胞免疫的蛋白质，并且Hp编码的超氧化物歧化酶（SOD）基因与侵袭性细胞内致病菌的SOD基因存在同源性，提示SOD涉及辅助Hp抵抗吞噬细胞的杀伤作用[8]。另外也有研究发现活Hp可下调病毒特异性CD8+细胞毒性T细胞应答及Th1细胞分泌细胞因子的反应，从而降低宿主的细胞免疫应答[13]。

hp与MHC

hp诱导的NK细胞分泌的γ干扰素使胃上皮细胞MHCⅡ类抗原表达增高，即增加对胃上皮细胞的细胞毒损伤作用[6]。Maekawa等发现Hp诱导胃上皮细胞MHCⅡ类抗原分子的表达比γ干扰素的作用强，并且胃上皮细胞可以起抗原提呈细胞的作用而参与对Hp的免疫应答[14]。

结语

Hp对宿主的影响及宿主对Hp菌苗的应答既包括炎症反应，也包括免疫应答；既涉及体液免疫应答，也涉及细胞免疫应答；既存在免疫保护作用，也存在免疫损伤作用。因此，深入研究并阐明Hp及其菌苗诱导宿主免疫应答的机理，将为有效的Hp菌苗的研制提供正确的理论指导及新的研究思路。

参考文献

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10FallerGetal.Gut,1997;41(5):619-623

11AppelmelkBJetal.InfectImmun,1998;66(1):70-76

12KnippUetal.FEMSImmunolMedmicrobiol,1994;8:157-166

免疫管理论文第2篇

关键词单克隆抗体F(ab′)2片段放射免疫显像

ThepreparationofF(ab′)2fragmentofmonoclonalantibodyTIGTC-Ⅲanditsapplicationintumorradioimmunoimagine

SHILe-Hua,YANGJia-He,CUIZhen-Fuetal.

EasternHepatobiarySurgeryHospital,TheSecondMilitaryMedicalCollege,Shanghai200433

AbstractObjective：InordertorealizetheimmunoimmagingwithF(ab′)2fragmentofmonoclonalantibody(TIGIC-Ⅲ)forPLC.Methods：Monoclonalantibody(TIGTC-Ⅲ)againsthumanprimarylivercancer(PLC)wasdigestedintoF(ab′)2fragmentbypepsindigestion.Afterlabelledwith131Iand125IradioiodinatedF(ab′)2wasinjectedintonudemicebearingtumorxenograftsofPLCviatailveinandradioimmunoimaginewasperformed.Results:TheexperimentresultsshowedthattheyieldofpureF(ab′)2was31.7%±2.4%,theimmunoreactivityofF(ab′)2basedonthecellbindingstudieswasretainedwell.Aftertheinjectionof131I-F(ab′)2intoPLCtumor-bearingnudemice,photoscintigraphywasperformedatintervalsof12h.Thexenograftswerevisualizeddistinctlyduring24～96h.Conclusion：Theratiooftumortonon-tumor(T/NT)washigherthanthoseoftheintactIgGinalltissues.XenograftsofPLCinnudemiceacumulatedTIGTC-Ⅲ.Theexcretionofradioactivitywasdecreasedrepidly.

KeywordsMonoclonalantibodyF(ab′)2Radioimmunoimagine

用胃蛋白酶法制成TIGTC-Ⅲ的活性片段F(ab′)2，标记上131I后进行了裸鼠人肝癌移植模型的放射免疫显像(RII)研究。

1材料与方法

1.1单抗TIGTC-Ⅲ的制备TIGTC-Ⅲ系将肝癌细胞株HEPG2免疫Balb/c小鼠后将其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合而成的杂交瘤分泌的一系列抗体之一，已经抗体的专一性分析［1］。

1.2抗体片段F(ab′)2的制备与纯化按Harlow方法进行［2］。

1.3TIGTC-Ⅲ和F(ab′)2的标记及其免疫活性测定用氯胺T法［3］。标记物用SephadexG-25柱分离，去除游离碘。0.22μm微孔滤膜除菌，用细胞结合分析法测定免疫活性。

1.4荷人肝癌裸鼠模型的建立［4］将PLC细胞接种在4周龄的Balb/c裸小鼠腋部皮下，待肿块长到0.8cm3左右时进行定位及治疗研究。

1.5放射免疫显像及抗体的生物学分布

1.5.1动物处理标记抗体注射前72h起，在饮用水中加1%碘化钾，以封闭裸鼠甲状腺对碘的摄取。

1.5.2TIGTC-Ⅲ及F(ab′)2在荷瘤裸鼠体内的分布［5］12只荷瘤裸鼠，每鼠注射7.4×106Bq的125I-F(ab′)2，给药后每24h处死3只，取肿瘤、血液及各脏器。分别称重并测其放射性算出T/NT。另取3只荷瘤鼠，从尾静脉注入125I-F(ab′)2及非特异性的131I-F(ab′)2，48h后处死，取器官组织称重后分别测放射性计数，计算定位指数。

1.5.3放射免疫显像每鼠注射200μCi/0.1mg的131I-F(ab′)2，对照组注射相同剂量的非特异131I-

F(ab′)2，每12h行γ照射。

1.5.4标记抗体的生物半衰期42只8周龄的Balb/c小鼠，分完整抗体组与F(ab′)2组。分别于给药后12、24、48、72、96、120h处死，分离血清并加200μl肝细胞(1×106)，测放射性计数后算出抗体的生物半衰期。

1.5.5TIGTC-Ⅲ及其F(ab′)2的体内药代动力学取6只8周龄Balb/c小鼠分全抗体与F(ab′)2组，给药后分别于6、12、24、48、72、96、120h自尾静脉取血10μl，测放射性后绘制放射性-时间曲线。

2结果

2.1抗体片段的制备纯化TIGTC-Ⅲ，经电泳检测纯度大于95%。用胃蛋白酶消化，16h以上消化完全。消化液经层析后第1峰为F(ab′)2。其产率为31.7%±2.4%。

2.2标记抗体的质量控制TIGTC-Ⅲ的标记率为72%，比活度为7.54MBq/mg，放化纯度92.5%±1.7%。TIGTC-Ⅲ及其F(ab′)2标记上碘后，与PLC细胞的结合率分别为45%与28%，mIgG与其F(ab′)2的结合率均小于5%。

2.3不同时间每克肿瘤及其它组织对TIGTC-Ⅲ及其F(ab′)2的摄取量见表1。

2.4不同时间的T/NT值见表2。

2.5定位指数静注碘标抗体后48h，测得定位指数TIGTC-Ⅲ为3.45，TIGTC-ⅢF(ab′)2为5.88。

2.6荷瘤鼠放射免疫显像注入抗体后24h瘤区有放射性浓聚，36h后肿瘤显像。显像最佳时间为全抗体96h左右(图1，B)，F(ab′)236～48h(图1，A)，mIgG整个显像过程无明显浓聚(图1，C)。

2.7抗体的清除速率及生物半衰期F(ab′)2在心血管的清除明显快于完整抗体，F(ab′)2的生物半衰期约20.0h，全抗体为52.6h左右，两者差异显著。

表1裸鼠组织对完整抗体及其片段的摄取率

Tab.1PercentageintakeofTIGTC-ⅢandF(ab′)2pergramoftissue

Tissue24h48h72h

TIGTC-ⅢF(ab′)2TIGTC-ⅢF(ab′)2TIGTC-ⅢF(ab′)2

Tumor0.311.412.210.793.110.68

Heart0.460.360.480.300.450.15

Blood2.511.451.870.621.620.41

Kidney0.911.750.926.870.760.59

Liver1.620.501.860.321.270.20

Lung0.860.940.670.580.630.22

Muscle0.360.250.310.240.420.15

Spleen1.390.811.520.401.230.19

Bone0.330.210.350.190.470.11

表2裸鼠注射完整抗体及其片段后的T/NT值

Tab.2T/NTvaluesofdifferenttissueinnudemiceafterinvivoinjectionofTIGTC-Ⅲ&F(ab′)2

Tissue24h48h72h

TIGTC-ⅢF(ab′)2TIGTC-ⅢF(ab′)2TIGTC-ⅢF(ab′)2

Cerebrum19.5018.3321.8020.2023.5022.80

Bone2.702.852.953.023.202.85

Blood0.690.890.711.180.781.22

Heart1.380.692.502.883.102.72

Intestine2.251.124.754.865.305.58

Kidney1.080.432.150.562.400.81

Liver2.072.552.603.843.024.24

Lung1.270.981.340.761.500.80

Muscle3.503.253.783.453.853.47

Skin0.430.660.981.721.421.56

Spleen1.671.902.253.442.483.89

Stomach1.410.722.853.983.704.65

图1F(ab′)2注入荷人肝癌裸鼠体内后72h的RII

Fig.1TheradioimmunoimageofPLC-bearingnudemice72hafterinjectionofF(ab′)2

3讨论

在以单抗为载体的放射免疫显像中，由于完整抗体的Fc段常与组织细胞的Fc受体结合而使本底清除减慢，从而影响成像，抗体片段优于完整抗体已被许多学者所证实［6］。我们实验结果亦表明F(ab′)2比完整抗体有如下优点：F(ab′)2进入肿瘤速度快，生物学分布特异性提高，定位指数上升，血清本底下降迅速，生物半衰期明显缩短，从而使成像时间提前，成像清晰。

随着影像技术的发展，使原发性肝癌的诊断及定位变得较为容易，因此，单抗在肝癌的应用主要在于放射免疫治疗，由于F(ab′)2的以上特点，使抗体片段在肿瘤部位的摄取量低于完整抗体，且生物半衰期短，免疫活性低，从而用于肝癌导向治疗不如完整抗体。如何解决这一矛盾将是以后进一步研究的目标。

在抗体片段的制备中有两个基本要求，即尽可能高的消化产率及保留免疫活性。本实验采用胃蛋白酶消化法，此法虽然产率较低，但方法简便，免疫活性较高。F(ab′)2片段的免疫活性在标记的前后均低于全抗体，可能是消化过程中酶对其损伤所致，为保留抗体的免疫活性，应尽量缩短反应时间。

作者简介：施乐华，男，40岁，肝胆外科学博士；

指导教师，吴孟超，男，中科院院士，博士生导师，主要研究肝癌的基础研究与临床治疗

作者单位：施乐华杨家和崔贞福吴孟超(第二军医大学东方肝胆外科医院，上海200433)

潘文舟孔令山(第二军医大学长海医院，上海200433)

王明库(黑龙江红兴隆管局中心医院，黑龙江155811)

4参考文献

1施乐华，吴孟超，陈汉etal.分泌抗人原发性肝癌单克隆抗体杂交瘤TIGTC的制备及专一性分析.第二军医大学学报，1996；17(4)：313

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3肖祥熊.实用放射免疫分析及其临床意义.上海：上海同济大学出版社，1985：5

4刘康达，鱼达，包炎明etal.裸鼠人肝癌模型在肝癌导向研究中的应用.中华肿瘤杂志，1988；10(6)：414

免疫管理论文第3篇

［关键词］妊娠相关血浆蛋白A；固相时间分辨荧光免疫；亲和素—生物素—聚乙烯胺—4,7二氯磺苯基1，10啡罗啉2，9二羧酸—铕复合物；唐氏综合征

DevelopADirectSolidPhaseLanthaneTimeresolvedFluoroimmunoassayReagentofPAPPAutilizingPVA

Abstract:ObjectiveTodevelopadirectsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassayreagentofPAPPAbysynthesizingacomplexof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+.MethodsPolyvinylamine(PVA)waslabeledwithbiotinstreptavidinandeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid(BCPDA).UsinglabeledPVAcomplex,WedesignedtwositesandwichtimeresolvedfluoroimmunoassayofPAPPAandevaluatedassaycharacteristicsofPAPPAkit.ResultsWesuccessedsynthesizingaconjuageteof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+andareagentofPAPPA.Detectionlimitsachievedwere0.7mIU/L.Thecalibrationcurvewaslinear010000mIU/L.Intraandinterassayimprecision(CV)was3.89%4.96%and7.35%9.27%.Recoverywas95.8%104.2%.ConclusionsTheconjugateof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+synthesiziedwasreactive,highlyfouorescent.Asortsofkitcouldbesynthesized,takingadvantageofit.ThereagentofPAPPAwaspotentiallysuitedforuseinclinicalwithhighlyanalyticalsensitivity.

Keywords:PregnancyassociatedplasmaproteinA;Directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay;StreptavidinbiotinPolyvinylamineeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid;Down''''sSyndrome

妊娠相关血浆蛋白A(PregnancyassociatedplasmaproteinA，PAPPA)是一种高分子α2糖蛋白，20世纪70年代在孕妇血清中被发现［1］。在孕妇血中主要PAPPA是胎盘滋养层组织分泌，它是一种异源四聚体，由两个分子量为200000~250000亚基构成。PAPPA亚基和两个嗜红细胞主要基础蛋白(Proformofeosinophilmajorbasicprotein)以二硫键结合而成［2］，在孕妇血中只存在微量游离单体PAPPA。PAPPA亚基由1547个多聚核苷酸构成，包括1个拉长的锌指结构，3个Lin—notch重复序列，以及5个短一致重复序列［3］。在体内PAPPA是一种蛋白酶，主要针对胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)和胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)起作用。胰岛素样生长因子I(IGFI)在促进细胞分裂和增殖起重要作用，它主要通过IGF1受体起作用，IGFI、II的生物活性受6个高亲和性IDFBP调节［4，5］。PAPPA主要用于产前筛查唐氏综合征(Down''''sSyndrome，DS)，迄今医学上对此病尚无有效的治疗和预防措施，只能通过产前筛查防止DS儿的出生，但目前开展的绒毛活检,羊水穿刺及脐带血穿刺均为侵入性检查,有1%～3%的流产率,且方法繁琐,出报告时间长,不适宜大范围孕妇的普查,仅限于高危人群的诊断。大量报道认为PAPPA可作为DS胎儿产前筛查的的标志物。在15周～20周通过结合孕妇孕周、超声诊断和FreeβHCG可以鉴别65%～75%，但要在3个月～6个月结合AFP、游离E3以及抑制素上述成分可鉴别85%～90%［6］。有文献［7］报道PAPPA在急性冠状动脉综合征(ACS)的早期诊断有一定的意义，PAPPA在ACS患者血清含量＜30mIU/L，同时结构不同于孕妇体内的PAPPA且存在动态变化，必须利用超灵敏的方法进行检测。国内PAPPA的诊断试剂大多为ELISA和PerkinElmer公司生产的解离增强时间分辨荧光免疫分析(dissociatedenhancelanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DELFIA)试剂，无国产PAPPA时间分辨荧光试剂。我们利用PVA(聚乙烯胺)作为载体结合BCPDA镧系螯合物合成一种高灵敏的固相时间分辨荧光免疫分析(directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DSLFIA)试剂。为提高检测灵敏度和克服BCPDA标记抗体使抗体失活的问题，我们引入了生物素亲和素(biotinstreptavidinsystem)系统。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1试剂4,7二氯磺苯基1，10啡罗啉2，9二羧酸［4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid,BCPDA自制］；纯化亲和素(Streptavidin，SA，Sigma公司)；硫代琥珀酰亚氨6生物素氨基己酯类［Sulfosuccinimidyl6''''(biotinamido)6hexanamidohexanoate，SulfoNHSLCLCBiotin，pierceChemicalCompany］；聚乙烯胺氢氯化物(Polyvinylaminehydrochloride，PVA,ChemicalDynamicsCorp)；硼酸钠、二甲亚砜(天津化学试剂有限公司)；单克隆抗体根据文献［5］选择Hyb234—5(StatensserumInstitut)作为检测抗体，mAb10E1(HyTestOy，Finland)作为捕获抗体；PAPPA标准品和质控品购于PE公司(质控血清：Control1508mIU/L，Control22325mIU/L，Control3为4952mIU/L)；鼠IgG(晶美公司)。

1.1.2仪器Wallac1420多标记计数仪(WallacOY，Finland)；HPLC硅柱TSK250尺寸排阻柱(BIORAD公司)；96白色微孔板(NUNC公司)、亲和素包被板(InnotracDiagnosticsOy公司)；Amicon可浓缩离心管(Amiconmicroconcentrationunits，MW30000Cutoff)

1.2方法

1.2.1BCPDA的制备参见文献详细步骤［8～10］。

1.2.2生物素聚乙烯胺BCPDA［(Bio)xPVA(BCPDA)y］复合物的构建［11］用0.5M的碳酸盐(pH9.1)缓冲液配制浓度为10mg/ml聚乙烯胺(PVA)溶液，将200μgNHSLCLCBiotin溶于20μl碳酸盐缓冲液中，取200μl上述PVA溶液加入20μl上述NHSLC—LCBiotin溶液中，振荡混匀，室温反应1.5h(PVA∶Bio=1∶15)，用0.5M碳酸盐缓冲液将混合液稀释到1ml，将固体BCPDA研磨成粉末状，先在上述1ml混合液中加入5mgBCPDA，用力搅拌，直到溶解，重复加3次BCPDA，5mg/次，共计20mgBCPDA，在室温放置5h～6h，直到溶液澄清，转移到透析袋中，用0.1MNaHCO35L透析、过夜、重复透析2次，尽可能除去没反应的BCPDA和生物素。

1.2.3HPLC纯化(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物离心浓缩上述(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物到0.3ml～0.5ml(用Amiconmicroconcentrationunits，MW30000Cutoff)。流动相0.05MTris缓冲液(pH7.70)，控制HPLC流速0.8ml/min，在325nm处监测层析液(325nm为BCPDA最大吸收峰)，上样后，马上收集，(Bio)xPVA(BCPDA)y在10管～16管约5ml左右，取10μl(Bio)xPVA(BCPDA)y层析液加入90μl水滴入亲和素包被板微孔中，温育30min，洗板，加入用Tris缓冲液配制的10M～5MEuCl3100μl，反应10min，洗板、干燥，用Wallac1420检测Eu3+的荧光强度，没结合复合物的被洗去了，没结合BCPDA的复合物因无法结合Eu3+而没有荧光，计算标记的PVA，大约每分子结合50个～100个BCPDA分子。

1.2.4构建亲和素生物素PVABCPDA［(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+］复合物［11］用0.1MTris缓冲液(pH7.8)配制小牛血清白蛋白(BSA溶液)60g/L，同时加入EuCl3，使Eu3+浓度为10-6mol/ml，用双蒸水配制亲和素溶液浓度为1mg/ml，取上述BSA溶液1ml，加入10μl亲和素溶液，再加入50μl的(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物(通过固相免疫分析，棋盘滴定法确定最佳用量比，步骤略，结果见后)，混匀，55℃温育1.5h，4℃保存备用。

1.2.5(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物反应活性用生物素化的各种浓度(0ng/50μl，0.5ng/50μl，5ng/50μl，50ng/50μl，100ng/50μl)鼠IgG包被96孔微板(同第7步)，用60g/LBSA和0.1mol/LTris缓冲液(pH7.8)10倍稀释(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物，在板的微孔中加入100μl稀释后的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物，室温反应30min，洗板、干燥，测量荧光强度(cpm)。本实验是验证复合物的反应活性。

1.2.6生物素标记10E1抗体［12］用二甲亚砜制备硫代琥珀酰亚氨6生物素氨基乙酯溶液(10mg/ml)，将抗体10E1溶于0.1mol/L硼酸钠溶液(pH8.8)，每1mg抗体中加硫代琥珀酰亚氨6生物素氨基己酯类溶液210μg混合，室温放置4h，在上述溶液中加入20ml1mol/LNH4Cl，室温反应10min，将反应液进行透析，除去未结合的生物素，将抗体浓度用分析缓冲液配置成8ng/μl，-20℃保存备用。

1.2.7单克隆Hyb234—5抗体包被96孔微滴定板将抗体溶于0.1M磷酸盐缓冲液(pH4.9)，配置成5μg/ml抗体溶液，在每一孔中加入80μl抗体溶液，室温反应20h，然后用生理盐水洗3次，然后每孔加120μl0.05MTrisHcl缓冲液(pH7.4含0.9%生理盐水、0.05%NaN3、0.5%小牛血清白蛋白BSA)浸泡2h。吸干缓冲液，干燥，密封4℃保存。

1.2.8样本收集、定标、灵敏度、精密度和回收实验分析过程选取怀孕8周、9周、11周妇女血清各一份，经PE公司的DELFIA试剂和D&G公司的ELISA试剂多次精确测定，值分别为：P1863.27mIU/L；P21273.63mIU/L；P32727.23mIU/L。用标准品稀释液(6%BSATSA缓冲液：150mmol/LNaCl、60g/LBSA、50mmol/LTrisHCl，pH7.8)将标准品稀释浓度为：S00mIU/L(稀释液)、S120mIU/L、S2200mIU/L、S31000mIU/L、S45000mIU/L、S510000mIU/L。标准品定标根据WHOIRP78/610(WHOInternationalLaboratoryforBiologicalstandards，StatensSeruminstitut，Denmark)，单位换算：1000mIU/L=4.5μg/ml。在单克隆Hyb234—5抗体包被96孔微滴定板，每孔加入定标液10μl，作8次平行测量，加入50μl生物素标记10E1抗体50μl，混匀，36℃，室温反应20min，洗板6次，加入100μl10倍稀释的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物，室温反应25min，洗板6次，吹干，Wallac1420测量荧光强度(cpm)，取均值，作标准曲线。将S00mIU/L做20次重复测试，计算均值(X)和标准差(s)，以X+2s为试剂的最小检测限。将Control1，Control2，Control3依据定标分析过程，同批测量20次，批间测量12次，用于评价精密度。对收集样本(P1、P2、P3)依据定标分析过程进行测量，然后将Control1、Control2、Control3分别等体积加入P1、P2、P3中进行测量，用于评价回收实验。

2结果

2.1用HPLC纯化(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物在10min～16min出现(Bio)xPVA(BCPDA)y的吸收峰，没有结合BCPDA的吸收峰在17min～24min出现,见图1。

图1净化（Bio）x－聚乙烯醇（BCPDA）y在高性能液化色谱（TSK－250过滤柱）上的变化图。（略）

流速控制在0.8ml/min，吸光率325nm

2.2用滴定法确定亲和素和(Bio)xPVA(BCPDA)y最佳配比SA量恒定0.01mg/ml，生物素标记的抗体包被分别浓度为0ng/孔、0.5ng/孔、5ng/孔、50ng/孔，缓冲液为pH7.8TrisHcl0.1M，Eu3+10-5M，(Bio)xPVA(BCPDA)y用量从40μl～55μl选择最佳值，50μl复合物荧光强度值(cpm)最佳，如图2。

图2滴定链球菌，（Bio)x－聚乙烯醇（BCPDA）y在10-3MEu3+,0.1MTris-Hclbuffer(pH7.8)缓冲液中的变化，0.01mg/ml链球菌，容积变动范围40μl~55μl，观察到最佳容积为50μl（略）

2.3验证活性用生物素化的各种浓度(0ng/50μl，0.5ng/50μl，5ng/50μl，50ng/50μl，100ng/50μl)鼠IgG包被96孔微板验证(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物的反应活性，在测定范围内成线性分布，见图3。

图3IgG维生素定量法标定曲线（略）

2.4PAPPA定标曲线及灵敏度在0mIU/L～10000mIU/L范围内定标曲线为线性分布，见图4。S0标准重复20次检测均值加2个标准差值代入标准曲线，计算出检测限为0.7mIU/L(数据没显示)。

图4PAPP-A标定曲线（略）

2.5批内、批间精密度对质控血清批内进行20次分析，批间进行12次分析，得到批内变异系数3.89%～4.96%,批间变异系数在7.35%～9.27%之间,见表1。

表1批内、批间变异系数比较（略）

2.6回收实验对收集样本(P1、P2、P3)依据定标分析过程进行测量，然后将Control1、Control2、Control3分别等体积加入P1、P2、P3中进行多次测量，分别计算回收率95.8%～104.2%,见表2。

表2回收实验结果比较（略）

3讨论

临床化学家最关心的问题是分析技术灵敏度，这也是临床诊断试剂的核心。近来，在临床化学检测物质的浓度的范围10-3mol/L～10-16mol/L。PCR以及其他的体外扩增技术使DNA、RNA检测方便、高效、特异。不幸的是蛋白不能复制，最敏感的定量方法是依靠蛋白之间的特异性结合如抗原抗体反应。一个提高蛋白检测灵敏度的方法就是信号放大，即在蛋白上标记可以检测的标记物，通过标记物的信号放大而达到更容易检测的目的。时间分辨免疫学技术是80年代迅速发展起来的的一种公认的最有发展前途的非放射免疫标记技术，其中荧光镧系螯合物具有较大的Stokes位移(275nm)，较窄的发射光谱(10nm)，较长的荧光寿命(10us～1000us)，而被广泛构建时间分辨荧光免疫试剂。临床运用最广泛的是PE公司生产的解离增强镧系时间分辨荧光免疫分析(dissociationenhancedlanthanidefluoroimmunoassay，DELFIA)试剂，它必须使Eu3+与螯合物分离，由于其信号较弱，必须加入增强液来发大信号，操作烦琐且在加样的过程中可能引起外源性的污染，这些弊端影响了它的应用。在1987年，Evangelista和Diamandis合成一种新的螯合物BCPDA，开创了固相时间分辨免疫荧光技术，解决了DELFIA上述问题［8，9］，但是BCPDA的较大分子量、表面特性和直接标记蛋白容易引起蛋白的失活对它应用带来一些问题，解决的办法就是连接一个载体。我们实验中引入了PVA作为载体，连接BCPDA和生物素亲和素。PVA直接连接蛋白技术难度较大，而生物素标记蛋白技术比较成熟，同时亲和素有4个生物素结合位点，可以起到信号放大作用，而提高检测灵敏度。我们实验中成功的合成了(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物，用它去识别生物素标记的抗体(见图3)，结果显示亲和力非常高。实验关键问题是选择SA和(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物最佳比，我们实验中做了7个浓度梯度，选取结合后荧光强度最大的(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物浓度。利用HPLC层析纯后的(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物回收率是68%。通过实验选择最佳检测抗体浓度、生物素化抗体浓度和标本用量。Jackson［13］分析了提高灵敏度的因素即两个关键的因素与最终的结合分析灵敏度相关：我们监测标记分子(放射性同位素、化学发光剂、荧光团)的能力；结合试剂的质量和实验条件，在临床化学存在一种误导是特别敏感的监测方法(化学发光、时间分辨荧光)能获得好的结果。其实这是错误的，如果实验试剂和条件(抗体的亲和性和特异性，固相结合物的自然特性以及清洗效率)不被选择，很难达到理想的检测效果。为达到较高的灵敏度，需要选择高灵敏度的标记技术、高亲和力的试剂和最好的分析条件(可将试剂的非特异性结合降到最小)。利用镧系螯合物的时间分辨荧光免疫分析是一种高灵敏的标记技术，关键是实验条件的选择，我们验证不同孵育时间下，(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物产出率，以及和生物素化抗体的结合能力(数据不能显示)。经过大量的实验选择了Eu3+的浓度，使其能和BCPDA形成最佳比例(数据不能显示)。反应条件的建立中，我们筛选实验反应温度(18℃～56℃，每5℃选择一次)和反应时间(10min～24h)，考虑到临床结果的报告时间，选择了20min(数据不能显示)。经过实验条件选择，形成了PAPPA的定标曲线，通过定标曲线确定最低检测限(见图3)。我们构建的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物可以用于多种像PAPPA这样利用双抗体夹心法检测的试剂，如AFP等。我们选择构建PAPPA主要考虑到我国产前筛查项目的自产试剂较少，而且DS筛查尤为重要，由于科研经费的问题，没有进行最佳单抗配对实验，只是参考了国外的相关文献。不过我们实验的核心是构建(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物，为以后构建其他试剂做一定的前期工作。我们构建的PAPPA试剂,回收实验和精密度试验显示，完全满足试剂盒要求。在今后的工作中，我们主要验证(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物和成品试剂盒的稳定性，以及进一步和PE公司的PAPPA的DELFIA试剂做大量的临床对比实验。总之，我们成功构建了(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物和PAPPA的成品试剂，它有较高的灵敏度、准确度和精密度，又克服了DELFIA试剂的缺点。

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免疫管理论文第4篇

审计是国家经济社会运行中免疫系统理论提出，他不仅是对我国审计监督25年来成功经验的总结升华，深刻揭示了审计的本质，丰富了审计内涵，而且科学地借鉴了医学免疫系统概念，形象生动地寓意了审计监督的功能，也为我们审计机关、审计人员提出了落实科学发展观所面临的新课题。那么，我们如何在科学发展观指导下的审计实践中充分发挥好审计在经济社会运行中免疫系统功能作用呢？笔者认为应重点从以下几个方面着手：

一、充分发挥审计免疫系统预防功能作用

审计预防功能，是审计免疫系统功能作用的前提。就是要通过审计预防及早发现带有苗头倾向性问题，及早感知风险，提前发出警报，起到预警的作用。

因此，一要重点关注财金的安全。这不仅要关注财政资金的安全，通过强化财政预算执行审计和财政决算审计，及早发现游离于财政预算外的政府性资金问题，及早发现虚列财政收入、财政支出问题，及早发现中央宏观调控资金使用中存在的问题等。而且要关注国有资产的安全，要通过深化对现代企业单位审计，及早发现影响经济持续健康发展的重要隐患问题，以及转移侵吞国有资产和国有资产流失等问题。还要关注金融安全，要通过对金融审计监督，及早发现影响国家宏观调控决策及货币政策贯彻落实中存在的问题，以及金融信贷资金风险等突出问题，并查找分析金融机构资产风险隐患和世界金融危机对我国经济社会的影响，以切实维护好国家利益和人民利益的安全。二要将审计监督关口前移。过去强调审计要当好经济卫士，往往侧重于事后审计监督，而现在要求发挥审计免疫系统预防功能作用，这就必须将审计监督的关口前移，突出事前审计，积极探索适应事前审计的措施和方式、方法。如：对财政资金重大支出项目的预算编制审计，增强财政预算的约束力，力求使重大的财政资金支出项目更趋合理、科学、规范。又如：积极探索对国有资产投资和各种国有资金项目投资事前审计，过去对国有资产资金投资项目审计，存在严重的滞后性，往往是项目建起来或项目建设完成后才去审计，其结果就是发现了问题也难以纠正，为时已晚。现在强调事前审计，就是要从国有资产资金投资项目立项、决策、投资项目设计方案、投资项目资金概算和投资项目招投标开始介入，并对投资项目资金管理、使用、投资项目决算、投资项目效益实行跟踪审计监督，以免尽可能地减少投资项目决策失误和投资项目建设中的损失浪费。再如对捐赠救灾资金的审计，由于这些资金往往容易在收取捐赠救灾资金后入账、送达、分配等环节上出问题，所以审计必须要提前介入，加强审计监督，确保爱心捐赠救灾资金发挥真正应有效用，维护好受灾人民群众的利益。

二、充分发挥审计免疫系统揭露功能的作用

审计揭露功能，是审计免疫系统功能的核心。要通过审计揭露违规、违纪、违法、经济犯罪、损失浪费、奢侈铺张、损坏资源、污染环境、损害人民群众利益、危害国家安全、破坏民主法制等行为以达到惩戒目的。因此，一要克服以往在审计实施中，重审计项目的组织实施，轻对违规、违纪、违法问题的处理；重审计项目的完成，轻对重大违纪违法案件的移送；重审计项目的质量，轻对违规、违纪、违法问题的揭露等现象。二要将依法审计核实的关系到国家宏观决策、国家利益、人民群众利益以及社会稳定的情况和问题，通过《审计报告》、《审计信息》、《审计要情》、《审计专报》等形式及时向党委、人大、政府和有关部门报告，有些问题还可以向社会披露，以引起党委、人大、政府和有关部门的高度重视，及时采取有力的措施医治经济社会运行中违规、违纪、违法的“病虫害”，铲除危害经济社会健康发展的“毒瘤”，以尽快修复健康。

三、充分发挥审计免疫系统抵御功能作用

审计抵御功能，是审计免疫系统功能的重点。就是要通过对审计查出的问题进行深入分析产生的原因，研究提出解决问题的对策及建设性意见和建议。以便改革体制、健全法制、完善制度、规范机制、强化管理、防范风险、提高经济运行的质量和绩效。因此，一要积极推行问责追究制。过去审计往往只查财政财务收支对不对、合法不合法等，很少问及领导决策正确不正确、管理的好不好、内控制度是否完善有效。对一些重大问题即使发现了，也只是收些违纪款了事。现在强调必须要将被审计单位责任人决策、管理、制度落实责任作为审计的重要内容，在查清问题、核实无误的情况下，分清责任、实行问责追究制，使违规、违纪、违法者得到应有的惩治。二要极力实行审计公告制，即把审计项目结果予以公开，公开披露一些部门、单位在执行政策、法规和日常工作管理中存在的问题，公开接受公众监督，它必将有利于更好地促进部门、单位政策、法规执行、规章制度健全完善和存在问题的整改落实，以堵塞漏洞，从源头上防止违规、违纪、违法问题的再度发生。三要依法查处大案要案，对一些违法违纪案件，尤其是重大违法违纪典型案，一经查实，要及时移送纪检监察和司法机关，进一步依法追究经济和刑事责任。以达到惩治违法乱纪者，警示教育的目的。四要优化审计免疫环境，力求达到“五个结合”，即审计免疫抵御与其他经济监督免疫抵御相结合；审计免疫抵御与环境免疫抵御相结合；审计免疫抵御与社会舆论监督免疫抵御相结合；审计免疫抵御与惩治免疫抵御相结合；审计免疫抵御与规章制度免疫抵御相结合；五要发挥审计三大主力免疫抵御优势，即国家审计免疫抵御功能优势；企业单位内部审计免疫抵御功能优势；民间审计免疫抵御功能优势，并形成合力，必将收到更好的审计免疫系统抵御功能的效果。

免疫管理论文第5篇

全市20个接种单位均有通过网络平台下载异地儿童接种信息，异地下载使用覆盖率100％。全市下载异地儿童25097人，占全市建档儿童数的7．5％，其中异地迁入儿童占76．6％，临时接种占23．4％。2．5短信功能使用情况2012年8月免疫规划平台短信功能开通，至2013年12月31日，全市接种单位共发送预约和漏种催种短信2748次，合计64446条。

2讨论

国家儿童预防接种信息管理系统的建设，实现了儿童预防接种信息管理由传统的手工管理模式向计算机信息化管理的转变；而福建省免疫规划管理平台的建立则实现了网络数据交换，信息共享，是免疫规划管理信息化的又一里程碑。分析2005—2013年全市建档情况，省市内流动儿童占全市建档儿童数的68．4％，其中44．8％为外市进入本市，23．6％为本市内变更接种点。可见免疫规划信息管理网络平台的建设适时解决了接种对象流动性大的难题。全市30d及时建档率低，平均仅18．2％，无法保证预防接种特别是流动儿童接种的顺利接种。原因除因系统未与产科对接，首针接种后未立即建档外，部分接种登记人员对系统操作不熟悉，习惯采用现场手工登记在册，过后再重新录入系统有关。分析显示，全市接种单位儿童个案上传及时率为100％，但上传成功率仅84．5％，主要是部分单位的个案因未联网而进行多个系统同时录入，使得内部个案编码重复以致无法上传。上传的在册儿童个案中，暂住儿童和流动儿童占我市接种儿童的3／5，为主要接种人群。且2007—2011年儿童数呈平稳走势，基本处于9年平均值上下（图1），说明在国家服务器关闭后，各接种单位仍坚持在信息系统录入，2005—2006年的数据因补录不全以致儿童数未达到平均水平。2012—2013年儿童个案总数明显高于平均水平，2012年增幅达39．8％，得益于我省建立了居民健康信息系统免疫规划管理子系统，省内各接种单位实现了数据共享，提高了接种人员的建卡积极性，而便利的异地下载功能也使得原先接种点变动频繁的儿童纳入了信息系统管理。

从重复建档情况看，点内重复建档仍占21．6％，说明部分接种单位未定期清理系统内重卡，点外重卡多数为平台建设前已录入的儿童个案，需上级疾控部门对点外重卡及时合并。全市所有接种点均已启用异地下载功能，有1／3的流动儿童为异地迁入儿童，说明异地下载功能可正常有效地使用。免疫规划信息管理网络平台短信功能的开通，实现了接种预约、漏种儿童催种，在查漏补种活动中也发挥重要作用，为全市免疫规划的实施带来便利。

免疫管理论文第6篇

关键词肺心病红细胞免疫功能脂质过氧化

Relationshipbetweenperoxidationinerythrocytemembraneandandredcellimmunefunctionincorpulmonalesubjects

JIANGYong-Tang,CHENXue-Kui,ANJi-Hongetal.

DepartmentofRespiratorySystem，The2ndClinicColleage-NornamBethuneUniversityofMecicalSciences,Changchun130041

AbstractObjective：Toevaluatetherelationshipbetweenperoxidationinerythrocytemembraneandredcellimmunefunctionincorpulaonale.Methods：Theredcellimmunefunctionandthelevelsofmalonyldialdehyde(MDA)inplasmanderythrocytemembraneweretestedbyredcellyeastmixtureroseandthiobarbituricacid(TBA)methods.Results：ThelevelsoferythrocyteC3breceptorwassignificantlydecreasedinacutestagecorpulmonale(P<0.01).ThelevelsofplasmaanderythrocytemembraneMDAincorpulmonalewerehigherthanthoseinhealthy(P<0.01).Conclusion：Theresultsindicatedthatlipidperoxidation,particularlyinerythrocytemembrane,mightcontributetothedecreaseoferythrocyteofreceptor.

KeywordsCorpulmonaleRedcellimmunefunctionLipidperoxidation

丙二醛(MDA)是脂质过氧化反应中重要的中间产物，MDA可严重损坏细胞膜组分、结构和功能〔见：JainSK.Theaccumulationofmalonyldialdebyde,anendofproductoffattyacidperoxidation,candisturbaminophospholipidorganizationinthemembranebilayerofhumanerythrocyte.JBiolChem,1984;259:339〕。红细胞膜上存在具有免疫粘附活性的C3b受体，由于红细胞免疫粘附(Redcellimmuneadherence,RCIA)作用，红细胞得以发挥携带和清除循环免疫复合物(CIC)，促进吞噬细胞吞噬，调节细胞免疫等多种功能〔见：郭峰.红细胞免疫研究概况.中华微生物学和免疫学杂志，1995；15(3)：18〕。为探讨肺心病患者红细胞膜MDA对红细胞C3b受体的影响，我们自1995年9月～1996年4月选择住院肺心病患者进行观察，报道如下。

1材料与方法

1.1病例选择正常对照组：体检健康者24例，肺心病组：60例。全部病例分两组：急性期32例，恢复期28例。

1.2方法

1.2.1红细胞C3b受体花环率(RBC-C3bRR)和红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)试验采用郭氏方法。

1.2.2红细胞膜脂质过氧化水平测定血浆及红细胞膜MDA测定用内藤氏法。膜蛋白定量采用Lowry法。

1.3统计学处理两组间比较用t或t′检验，用直线相关分析和多元逐步回归分析判定各指标间的关系。

2结果

2.1红细胞免疫功能肺心病RBC-C3bRR明显降低，RBC-ICR和正常无显著差异。血浆MDA和红细胞膜MDA水平明显升高。急性期肺心病患者RBC-C3bRR和RBC-ICR显著低于恢复期患者，后者RBC-C3bRR降低和血浆MDA升高仍和正常组有显著差异。RBC-ICR升高和红细胞膜MDA升高与正常组无明显差异。

2.2红细胞C3b受体活性和脂质过氧化损坏关系肺心病患者血浆MDA和红细胞膜MDA水平呈正相关，血浆和红细胞膜MDA水平升高和RBC-C3bRR降低呈负相关，多元逐步回归分析血浆及红细胞膜MDA与红细胞C3b受体的偏回归系数分别为-0.1160，-0.1613，复相关系数R=0.7601。提示红细胞膜MDA和红细胞C3b受体关系更密切，见表1，表2。

表1肺心病患者血浆MDA和红细胞膜MDA与红细胞C3b受体花环率相关分析(n=60)

Tab.1RelativeanalysisbetweenRBC-C3bRRandMDAinplasmaanderythrocytemembraneincorpulmonal(n=60)

Dependent

variableIndependentrP

RBC-MDAP-MDA0.9209<0.01

RBC-C3bRRRBC-MDA

P-MDA-0.8718

-0.7339<0.01

<0.01

表2红细胞免疫功能、血浆和红细胞膜MDA水平测定结果

Tab.2Resultofredcellimmunefunction,MDAinplasmaanderythrocytemembrane

nRBC-C3bRRRBC-C3bRRP-MDARBC

(±s，%)(±s，%)(nmol/ml)(μmol/ml)

Normalcontrol2419.50±4.308.25±6.154.67±0.100.452±0.026

CorPulmonale6010.87±4.851)7.94±5.774.62±0.241)0.569±0.0081)

Remissionstage2815.55±2.731)9.30±6.175.12±0.141)0.469±0.046

Acutestage326.78±1.032)6.74±4.932)7.55±0.212)0.641±0.0572)

Note:vsnormalcontrol,1)P<0.01;2)vsremissionstage,P<0.01

3讨论

本组资料显示：肺心病患者红细胞C3b受体花环率明显降低，红细胞免疫复合物花环率无明显改变。提示红细胞C3b受体降低，红细胞免疫粘附功能降低，为原发免疫功能低下，即红细胞膜上C3b受体受到破坏和影响所致。我实验室曾报道肺心病患者血浆MDA水平升高。本研究进一步证明其红细胞膜MDA亦增高，两者呈正相关。MDA是脂质过氧化降解的中间产物，脂质过氧化作用可严重破坏细胞膜成分、结构和功能。相关分析发现肺心病患者MDA升高和红细胞C3b受体活性呈明显负相关。进一步多元逐步回归显示两者关系更为密切。提示血浆MDA升高，尤其是红细胞膜MDA升高可以严重影响C3b受体活性。

免疫管理论文第7篇

1材料与方法

1.1药物及试剂舒关温经冲剂(SGWJCJ)由制川乌、川断、威灵仙、土鳖虫等药组成。舒关清络冲剂(SGQLCJ)由生地、功劳叶、雪花、鬼箭羽等药组成，県痹冲剂(WBCJ)为大连长白山制药有限公司出品。抗大鼠IgG免疫血清，由镇江医学院检验系提供。

1.2实验动物体重150～200g雄性大白鼠(SD)，由南京中医药大学实验动物中心提供。

1.3方法大鼠佐剂性关节炎模型，参照Freund''''s完全佐剂性关节炎法［2］，将大鼠随机分为6组，每日分别灌服不同的药物，连续21d。另组灌生理盐水作正常对照。28d后大鼠眼眶取血进行免疫指标测定。

2结果

2.1IgG含量和循环免疫复合物(CIC)测定采用单向免疫扩散法测IgG，DEG6000沉淀法/比浊法测CIC，结果IgG(Dimm)正常组11.300±1.930，模型组14.100±0.487，比正常组显著增加，P＜0.01，舒关温经冲剂和舒关清络冲剂小剂量组为11.388±2.205和11.838±1.604，均显著低于模型组，P＜0.01，而两冲剂的大剂量组降低不明显，CIC各组数值变化不显著。

2.2红细胞免疫功能测定［3］结果见表1。

表1舒关冲剂对大鼠佐剂性关节炎红细胞免疫功能的影响(±s，%)

Tab.1EffectsofSGCJonRBC-C3b-R&RBC-IC-Rofratswithadjuvantarthritis(±s，%)

Dose(g/kg)nRBC-C3b-RRBC-IC-R

Normal—815.667±4.6676.500±2.811

Model—810.875±2.6961)10.625±2.5602)

SGWJCJlargedosage4.8914.888±2.9773)10.286±2.430

SGWJCJlittledosage1.6712.857±2.9113)9.182±2.603

SGQLCJlargedosage4.8816.375±2.6154)9.625±2.825

SGQLCJlittledosage1.6814.625±5.3443)8.125±1.8853)

WBCJ6.01115.730±4.6903)9.444±2.639

Note:1)P＜0.05，2)P＜0.01，vsnormal；3)P＜0.05，4)P＜0.01，vsmodel

3讨论

目前普遍认为类风湿性关节炎的发病过程是免疫调节功能失调和红细胞免疫功能异常两者共同作用的结果［4］。

利用Freund''''s完全佐剂刺激SD大白鼠形成免疫反应，造成免疫功能失调。本次实验中模型组与正常对照组比较：RBC-C3b受体花环率下降(P＜0.05)，RBC-IC花环率上升(P＜0.01)，IgG上升(P＜0.01)，CIC也有所提高(P＜0.05)，这与以往的一些报道相符［1，4］。红细胞免疫是机体免疫系统的重要组成部分，而红细胞主要通过膜上C3b受体粘附免疫复合物，携至肝、脾，由吞噬细胞吞噬［5］。因此红细胞C3b受体活性的强弱直接影响机体中免疫复合物的被清除的程度，类风湿性关节炎患者是由于抗原进入机体被巨噬细胞吞噬并与其膜上的HLA-DR分子结合成复合物引起免疫反应，激活B淋巴细胞，分泌大量免疫球蛋白，又与自身IgG结合形成CIC沉积在关节膜，激发胶原酶和破骨细胞致使关节软骨和骨破坏而发病。我们这次试验说明舒关温经冲剂、舒关清络冲剂能有效地恢复红细胞的抗原提呈功能，从而调节免疫紊乱，以恢复机体的正常免疫功能，这对机体祛除病邪及疾病的恢复有着积极的作用。

许化溪镇江医学院检验系，镇江212001

作者简介：陆跃鸣，女，39岁，实验师；

周学萍，女，39岁，中医内科博士，副研究员

作者单位：(南京中医药大学，南京210029)

4参考文献

1何绍奇主编.现代中医内科学.北京：中国医药科技出版社，1991：506-508

2徐叔方.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1985：534-536

3郭峰.红细胞免疫功能的初步观察.中华医学杂志，1982；61(12)：715