摘要:以实验室前期构建的N端融合SUMO标签的多形拟杆菌肝素酶Ⅰ(SUMO-Bt-Hep Ⅰ)生产菌株重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pE-SUMO-Bt-HepⅠ为研究对象,通过单因素确定其最佳表达条件:诱导温度25℃、诱导剂浓度0.4mmol/L、诱导时间12 h;首先通过Plackett-Burman试验,筛选出培养基中3个主要影响酶活的因素:葡萄糖、酵母提取物和蛋白胨。并通过响应面试验确定最佳培养基为:葡萄糖9.52g/L,酵母提取物9.61g/L,蛋白胨19.92g/L,硫酸铵4g/L,磷酸氢二钠18g/L,磷酸二氢钾3g/L,硫酸镁5g/L。在此最佳培养基下发酵酶活预测可达55133IU/L,3次验证试验获得的SUMO-Bt-HepI酶活力平均为56961 IU/L,与理论预测值接近,比优化前(24215.9 IU/L)提高了2.3倍。通过5L发酵罐的分批补料扩大培养得到的最高发酵酶活为3.937×10^5IU/L,比摇瓶提高了6.91倍,这是目前报道发酵生产肝素酶I的最高水平,对工业化应用具有一定的指导意义。
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