1、挑选本院2010年6月至2012年12月送检病理科支气管镜刷检细胞学标本252例。所有的患者最后均确诊为肺癌。男184例，女68例，年龄44～85岁，(平均66．3岁)。所有的患者行支气管镜刷检，同时薄层液基细胞学涂片与传统涂片。
2、仪器:美国SurPathTMPrepstain全自动液基薄层细胞制片染片机(BDTriPath，BurlingtonNC，USA)及相关耗材。采用奥林巴斯电子支气管镜(BF-260或1T260工作镜)进行检查。镜下发现肺癌的直接征象或间接征象者，根据胸部CT提示的病变行透视下支气管镜肺活检。所有患者均在活检部位采用南京微创一次性保护型细胞刷刷检，将毛刷头直接在玻片上常规涂片1张。再将毛刷头置于盛有10mlCyteRichRed固定液的50ml离心管中充分震荡漂洗收集细胞。
3、制片方法
3.1传统涂片方法:纤维支气管镜刷头直接涂抹于载玻片上，涂片1张，干燥，95%乙醇固定10min，常规HE染色镜检。
3.2BDTriPath制片方法:标本加入专用50ml离心管中，使用程控离心机以Hettich3#程序600r/min离心10min，迅速管架倒置180°倾出上清液，加入CyteRichRed固定液20ml，静置30min，Hettich的3#程序以600r/min离心10min，迅速管架倒置180°倾出上清液，涡漩混合器振荡均匀，加入10mlTris缓冲液，混均，移至12ml的离心管，Hettich的4#程序以600r/min离心5min，迅速管架倒置180°倾出上清液，涡漩混合器振荡(15±5)s。管架放在PrePStain系统上，静置10min，等待上机自动制片染色。
4、判断标准:涂片诊断采用正常、可疑癌细胞、癌细胞三种分类方法，后两项为阳性标本。尽量由同一位医师操作电子支气管镜采集标本，由两位细胞病理学医师同时阅片镜检，以找到癌细胞为阳性。
5、统计学方法:统计学处理数据采用SPSS10．0软件包进行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
二、结果
两种涂片质量比较:传统涂片，涂片范围大小不一，涂片背景红细胞白细胞多，细胞分布厚薄不均，胞质核浆结构对比不明显，胞核染色质均一模糊、核仁不清;支气管镜刷检细胞标本LCT制片后，细胞集中于涂片范围直径15mm专用玻片上，细胞界限清楚，涂片背景干净清晰，细胞分布单个散在或成团分布，有立体感，胞质着色鲜艳、易于观察，胞核核膜分明，核内染色质及核仁清晰可见。薄层液基细胞学涂片诊断肺癌阳性率为58．33%，(146/252)，其中中央型肺癌98例，周围型肺癌48例。传统涂片诊断肺癌的阳率为33．19%，(84/252)，其中中央型肺癌68例，周围型肺癌16例。液基薄层细胞学与传统涂片的阳性率的差异有统计学意义P＜0．05。
三、讨论
支气管镜刷检细胞学标本应用传统涂片方法制片，受细胞新鲜程度、细胞量、出血及炎性背景、制片技术等因素影响，造成背景不清晰、涂片细胞易重叠、厚薄不均、细胞形态不易观察、有意义细胞数量偏少，容易出现假阴性或假阳性结果，漏诊重要病变。液基薄层细胞学制片技术(LCT)是近年来出现一种制片技术的革新，明显优于传统巴氏涂片的检查方法，其中有代表性的是BDThiPth离心沉降技术和新柏氏(ThiPthTCT)模式技术。两种方法工作原理不同，分别为重力沉降式和过滤膜式，已经广泛成熟应用于宫颈细胞学检查和TBS诊断报告，对比传统巴氏涂片，宫颈癌及癌前病变(低度鳞状上皮内病变和高度鳞状上皮内病变)检出率大大提高，标本采集及制片质量的优越性是传统涂片技术无法比拟的，特别是BDThiPth制片技术在细胞数量、背景去除非诊断性杂质、全自动制片染色及诊断质量尤为突出。美国FDA认证:超柏式液基薄层细胞学检查是所有液基细胞学技术中检出率最高的技术。2005年美国病理协会非妇科细胞学实验室比较液基制片方法与传统制片方法在体液样本检测能力，证实液基制片方法更容易检出肿瘤。
对比传统涂片，LCT制片使细胞在载玻片上分布均匀，厚薄一致，细胞数量多，集中于15mm范围内易于阅片，核染色质着色鲜明，核浆对比效果好，易于观察核结构，染色背景清晰，制片质量十分满意，阳性率显著提高。LCT制片技术和诊断质量体会:支气管镜刷检由于全部收集或大部分收集送检标本，最大程度保留病变细胞，尤为适用LCT制片方法;液基涂片中的细胞核可能不如传统涂片中那样深染，但细胞核异型性是判读恶性或可疑恶性病变的重要重要标准，一般认为核占优势、核浆比例高、核膜不规则、染色质凝块状、核仁清或多个小核仁为恶性证据;巴氏染色胞浆在区分腺癌或分化鳞癌很有帮助，前者胞浆见空泡，后者胞浆橘黄色、含角蛋白;仔细观察成团核深染的细胞，如怀疑异常，在背景中全面寻找单个异型细胞更有意义;提高制片质量显著，但诊断阳性率的改善还需病理诊断医师勤于积累，LCT在支气管镜刷检细胞标本应用时间及应用范围还比较晚，对同一份标本同时进行普通涂片，以积累经验，减少误诊。
支气管镜检查是目前诊断肺癌的常规检查方法，刷检联合组织活检的重要手段。传统支气管镜黏膜细胞学检查是在支气管镜检查过程中用支气管毛刷直接在普通玻片上涂片，诊断率低。LCT对肺癌有更高的诊断率。国内也有少量文献报道。本研究结果显示，经过与组织病理学对照，普通涂片法检出敏感度为33．19%，而LCT检出敏感度为58．33%，较普通涂片法提高了25．14%，差异有统计学意义(P＜0.05)。
四、总结
1实验对象及样品制备本实验对象为半年内未接受过输血的健康中国人12名，抽取静脉血5ml，使用ABO血型检测试剂检测其ABO血型。其中A型血2人，B型血6人，O型血3人，AB型血1人，RhD血型均为阳性。样品制备人员将A、B、O血型相同且测定的8种血型抗原至少有2种不相同的单一血样制备成体外混合血样。混合血样依据红细胞数按一定比例混合，混合比例分别为95％／5％、97％／3％、98．5％／1．5％、99．5％／0．5％，各比例混合血样的例数分别为8例，8例，8例，10例。样品制备人员将所有单一和混合血样编号后发放给检测人员进行检测分析。
2仪器和试剂本实验所用检测仪器为美国BeckmanCoulter公司生产的FC500型号流式细胞仪。使用抗体为瑞士DiaMed公司生产的单克隆抗体产品，以及SEROTEC公司生产的FITC荧光标记的羊抗人免疫球蛋白。
3实验方法用细胞稳定液将EDTA抗凝的新鲜血稀释后，加入单克隆抗体，使之与相应的红细胞表面抗原结合，并用荧光素标记的示踪抗体标记红细胞表面抗原抗体复合物。使用流式细胞仪对红细胞表面特定血型抗原的表达情况进行数据采集和分析。通过对此方法检测的特异性和灵敏度、信噪比和污染携带率、检测样品稳定性和操作稳定性等方面的检测，验证流式细胞仪检测异体血液回输方法的准确性和可操作性。
二、实验结果
1抗原检测特异性和灵敏度经检测，这46例血样的检测判定结果为：12例单一血样全部被检出单峰并被准确判为阴性。8例95％／5％和8例97％／3％比例混合的血样均被检测出两个以上双峰，所有应为混合双峰的样品均被准确检出；8例98．5％／1．5％比例混合的血样在应出现双峰的样品图中能被识别为双峰，但个别抗体双峰分离效果不佳，需进行抗体优化程序后方能被判定为双峰；10例99．5％／0．5％比例混合的血样中，只有4例样品被判断为含2个以上双峰，其他混合样品由于混合比例低于抗体检测限而无法判定。
2仪器信噪比和污染携带率
2.1仪器信噪比以8种抗体在95％／5％混合红细胞样品中只加入荧光示踪抗体时，表达区域的红细胞数占已设定的红细胞区域内细胞总数的百分比作为噪音，以3倍噪音作为该抗体的检测限
2.2污染携带率根据流式细胞仪检验要求，在完成一次样品检测后立即检测一支纯水空白管，记录30s内红细胞设定区域内检测到的颗粒数（N），重复200次，将检测到的颗粒数相加，用此数值除以红细胞设定区域内的细胞收集总数（A），并与重复次数作比，乘以100％得到污染携带率（CR）。公式为：CR＝（N1＋N2＋…＋N200）／（A×200）＝108／（50000×200）＝0．001％。计算所得结果符合仪器厂商推荐的污染携带率小于1％的要求，说明仪器连续进样检测不同样品不会因进样器污染而导致假阳性结果的出现。
2.3样品稳定性在8例97％／3％混合的血样和12例单一血样中分别任意挑选1例，分别分装在4个离心管中，冰箱4℃保存。在制备血样的第1、5、14、28天分别对这两例血样进行血型抗原检测，测定血液样品随时间变化的稳定性。结果显示，经过4周的冷藏存放，混合和单一血样图的锋形及相对位置无显著变化，检测结果稳定。
2.4操作稳定性在46例血样中选出6个样品，其中包含单一血样和各比例混合血样。将其分装成3份，分别由3位检测人员完成对血型抗原的检测，验证不同操作者对检测结果判定的一致性。结果显示，3位检测人员的检测及判断结果一致。
三、讨论
1方法验证本实验应用流式细胞术的血型血清学方法对46例血样进行红细胞血型抗原的检测，其中，12例单一血样的特异性验证结果全部为阴性，符合世界反兴奋剂机构关于兴奋剂检测方法的检测结果应满足100％阴性率和0％的假阳性率的特异性要求。对方法灵敏度的验证结果显示，3％及以上比例少量混合的红细胞被检出率达到100％。当少量混合的红细胞比例降低时，部分样品某些抗原表达与非表达的红细胞群分离效果不好，出现融合峰或拖尾峰影响判断，此时进行抗体优化程序可以解决或改善峰形问题。而当混合比例进一步降低至0．5％少量混合时，除了峰形问题外，由于定量结果低于抗体检测限而使混合血样检出率明显降低。造成这一结果的原因可能有：1）红细胞血型抗原密度和抗原性强弱不同，导致其与抗体结合能力存在差异；2）每种抗体效价不同，检测限也有高低，其检出能力由检测限值最高的抗体决定；3）这8种抗体分别为单克隆抗体IgM和IgG，由于抗体结构特点，结合了IgM抗体的红细胞更易聚集，造成单细胞悬液制备不完全，聚集的多细胞被检测为单细胞，导致定量结果低于检测限，因此，尽管有的检测人员能够从柱状图上观察到微弱的双峰，但由于测定到的混合比例低于检测限而不能将其判定为阳性。此外，流式细胞仪状态也会对检测结果造成影响，导致少量混合的红细胞信号无法被检测人员识别。噪音和污染携带率影响了流式细胞仪的检测能力，通过每次上机检测前对仪器的校正以及对噪音和污染携带率的计算，来评估仪器状态。仪器噪音过大，会掩盖微弱的双峰信号，导致假阴性结果的判定，而污染携带率过高则可能导致假阳性结果。因此，在检测过程中对仪器状态的确认是必要的。定期的维护和保养可以减少仪器本身对结果的影响。人体血量约为4～5L，其中，循环血量约占总血量的4／5。有研究显示，循环系统血红蛋白增加5％可以提高运动能力，输血量太少则达不到增加血红蛋白量进而提高有氧耐力的目的。由于异体输血伴随感染、溶血、血液粘稠、疾病传播等高风险因素，采用极少量输入多个供血者血液的可能性较小，因而，此方法的检测灵敏度能够满足兴奋剂检测的需要。通常红细胞在人体内的寿命约120天，这意味着，在异体输血后，理论上最多可以有长达3至4个月的检测窗口期能够检测到异体血液回输。相比传统兴奋剂只有几天的检测窗口期来说，该方法能够大大提高兴奋剂检查的效率。用细胞稳定液稀释的混合血样在冷藏条件下至少可存放4周，以此模拟运动员进行异体输血后一段时间体内不同红细胞群的比例关系。在4周内，不同操作人员对相同样品测得的混合红细胞群比例无明显变化，说明此方法稳定性好，可操作性高。
2阳性判定根据世界反兴奋剂机构（WADA）对于免疫抗原法检测兴奋剂的要求，异体血液回输阳性判定的标准为：在1份血样中，当有2个或2个以上特定红细胞抗原存在多于1种表型时，判定为异体血液回输阳性（AAF）；当只有1个特定红细胞抗原存在多于1种表型时，判定为可疑（ATF）。正常情况下，每个人体内所有红细胞抗原的表达是唯一的，即要么表达，要么不表达，当体内某种红细胞抗原同时存在表达与不表达的情况时，即存在两种不同的红细胞群，提示有异体输血。当然上述判定还需要排除嵌合体血型情况。嵌合体血型多发生在异型输血、异卵双生、双精受精和异型骨髓移植后。异型输血、异型骨髓移植属于获得性嵌合（人工嵌合），异卵双生、双精受精是遗传嵌合，属于先天性嵌合。先天性嵌合，指在胚胎或妊娠时期形成的嵌合。先天性嵌合分两种情况，一种是由于妊娠早期异卵双生子之间存在血管交叉吻合，一方的造血干细胞经由吻合的血管通路进入到另一方体内，在获得性免疫耐受的基础上，不同来源的造血干细胞分别产生两群不同表型的红细胞。另一种是在受精过程中，由2个卵细胞和2个相互结合而产生四倍体，四倍体受精卵继续分裂就可能产生多种不同来源的细胞系。嵌合体现象会导致血型遗传不符合经典遗传规律。此外，某些疾病也会导致嵌合体现象。因此在采用本方法检测发现异体血液回输阳性时，运动员需进行嵌合体血型鉴定，以排除先天性嵌合情况。
3红细胞血型抗原血型是血液系统的一种遗传多态性。传统的血型概念指的就是红细胞血型，是指能以抗体来分类的红细胞抗原表型。红细胞血型抗原是红细胞表面的化学构型，其形成的物质基础是红细胞膜上的蛋白质及结合到脂质和蛋白质上的糖分子。根据生化特性不同，红细胞血型抗原可分为两类，一类是由糖分子结构决定的血型抗原，如ABO、Hh，Lewis，P，I等血型；另一类是由蛋白质结构决定的血型抗原，如Rh，MNS，Kell，Kidd，JK等血型。人类血型抗原由血型基因决定，同时受调控基因或修饰基因控制，具有个体差异性和种族差异性。WADA对于流式细胞术检测异体血液回输的方法中涉及到的红细胞血型抗原的选择未做明确规定，一般以红细胞血型抗原表型在人群中表达的比例作为选择依据，在人群中表达型和不表达型均占有一定比例的血型抗原可作为候选抗原。表3列出了不同研究、赛事及机构选择的血型抗原种类和数量。可以看出，尽管各研究根据人群表达情况不同，选择的血型抗原有所差异，但是都包括本文研究的这8种基本的血型抗原。本研究选择了8种公认的在人群中有适当比例分布的血型抗原进行中国人样本的检测分析的结果发现，受试的11名中国人中最多有3人存在ABO血型及其他8种血型抗原表型完全一致的情况。换句话说，假如这3个人相互之间进行异体输血，且排除了红细胞血型抗原密度的个体差异时，将不能被检测为阳性。理想状态下，能够检测的候选红细胞血型抗原种类越多，检测的假阴性率就越低，但对于大样本量的实际兴奋剂检测工作来说，可操作性较差。因此，科学地选择红细胞抗原种类进行检测，可以有效提高兴奋剂检测效率。李晟玮对Rh、Kell、Duffy、Kidd、Lewis、P、MNS和Luth等系统中的21个候选血型抗原进行了检测，发现其中Leb、E、Jka、Jkb、M、C、e、c等血型抗原更适合于检测中国人群异体血液回输，并发现增加检测血型抗原的数量，能够有效减少异体输血检测假阴性发生的概率。意大利的Donati等人也有类似报道，他们发现，在8种基本血型抗原的基础上增加另外5种（e，s，K，Lea，Leb）血型抗原后，能够提高混合血样的检出率。然而，在实际兴奋剂检测工作中，实验室检测人员无法得知所检测样品的运动员个人信息，这为根据不同种族运动员选择不同血型抗原的个性化的检测手段的实施带来一定难度。因此，在近两届奥运会异体血液回输的兴奋剂检测中，都只选择了这8种基本血型抗原进行检测。
四、小结
脱落细胞学检查是临床病理诊断的重要手段，一张高质量的细胞涂片，能提高恶性病变检出率。本院近年采用薄层液基细胞涂片技术（LPT），改进细胞涂片方法，取得较好的效果。报道如下。
1材料与方法
1.1一般资料
随机取本院2006年1月至2007年1月送检标本痰液、胸腹水、尿液及宫颈涂片计957例份，其中男523例，女434例。每例做常规涂片2张以作对照。
1.2离心机，振荡器。
1.3液基细胞试剂
购自利普公司，由2004年4月通过美国FDA认证。
1.4常规细胞涂片
取宫颈刮片或痰液含血性或灰白粘稠区制成涂片2张；取胸腹水10ml，1000转/min，离心10min，弃上清液，混匀沉淀物后涂片，干燥后95％酒精固定15min，HE染色后镜检。
1.5薄层液基细胞涂片
取宫颈刮出物或痰液含血性及灰白粘稠区入细胞基液，混匀静置30min；取胸腹水、尿液等体液标本50ml，2000转/min，离心10min，弃上清液，混匀沉淀置入细胞基液30min，含血性物较多的可适当延长时间。在备用试管内倒入4ml清洗液，再加入含标本（痰液、胸腹水、尿液等）的细胞基液，缓慢倒入，可见到分层现象。离心2000转/min，10min，弃上清液，振荡器混匀，加入等量的液基细胞涂片液，混匀涂片。干燥后95％酒精固定15min，HE染色后镜检。
2结果
957例液基细胞标本共检出恶性瘤细胞（含可疑）109例，宫颈18例为异常上皮细胞，本组就薄层液基细胞涂片与常规细胞涂片在灵敏度方面和镜下特征进行比较。
2.1胸腹水共检407例，液基涂片检出恶性瘤细胞（含可疑）73例，常规涂片64例，灵敏度提高12.3％；痰液共检164例，液基涂片检出阳性数8例，常规涂片6例，灵敏度提高25％；尿液共检229例，液基涂片检出阳性28例，常规涂片18例，灵敏度提高35.7％；宫颈涂片157例，液基涂片报告鳞状上皮异常18例，常规涂片16例，灵敏度提高11.1％。见表1。表1两种涂片方法对各种脱落细胞标本检测结果比较（略）
2.2镜下特征比较
(1)使用传统方法制作的痰液涂片（宫颈涂片）较厚，粘液、杂质及坏死物含量较多，细胞缺乏完整性，结构模糊不清。浆膜腔积液涂片细胞堆积较厚，分布不均，含较多红细胞，有红染的背景（图1）。(2)用薄层液基制作的涂片细胞面积缩小，涂片背景干净；红细胞大多消失，痰液和宫颈
涂片中粘液溶解；细胞层次分明，胞核胞质结构清晰（图2）。
3讨论
脱落细胞学检查是一项方便简单的检查方法，它有利于癌症筛查、早期发现癌症、指导治疗等。传统的病理细胞学制片均采用直接涂片，推片或离心后涂片，制出的涂片细胞分布不均，重叠，背景含粘液、红细胞、杂质、坏死细胞等，影响镜检，阳性检出率低。本组痰检和尿液检测灵敏度较低，主要是标本取材不正确，痰液内杂质、粘液、炎性细胞过多，过厚而影响诊断；尿液中本身细胞含量较少，离心不彻底，涂片过稀导致细胞很少，缺乏有效的诊断细胞数。目前应用的薄层液基细胞技术，挑取的细胞量较传统细胞多，采取标本后放入保存液中，及时软化粘液和固定以保存细胞，加入清洁液通过分层离心技术去除标本中的粘液、红细胞及其他非细胞碎片，加入细胞后振荡将细胞团块分散，形成单个细胞样本，最后将细胞均匀地涂在载玻片上，进行固定和染色。涂片时用细胞混悬液约30ul在玻片上涂成直径1cm大小圆形分布区域，这样使被检细胞集中，数量多，易于阅片。LPT与常规制片方法比较，改善了样本收集率，并使细胞均匀的分布在载玻片上，提高了检出的阳性率。该技术不仅保存细胞的完整性，还保全了细胞抗原性，由于采集的细胞全部存放于细胞保存液内而不被自溶及污染，可多量涂片进行免疫组化染色及原位分子杂交［1］（图3）。
薄层液基技术制片的优良性，可明显提高癌症确诊率，能为临床提供可靠的诊断依据。在筛查宫颈癌方面，优于传统的巴氏涂片，采用TBS报告系统国际诊断标准，以得到了普遍认可［2］。该技术用于痰液、尿液、浆膜腔积液也能提高恶性细胞检出率,为临床治疗提供可靠的诊断依据。但LPT技术也有不足之处，成本较高，不能在基层医院普及。在技术方面一些问题还有待改进，如细胞固缩等。
【参考文献】
全器官脱细胞支架的制备是肝脏组织工程的基础，通过利用物理、化学或酶解等方法去除细胞成分和遗传物质，获得与原有器官相似的超微立体结构和大部分细胞外基质（ECM）成分，保留了完整的支架。1997年Cao等首次制造了人工耳，近年来脱细胞支架已运用于心、肺和肾等器官的组织工程研究，结果表明，脱细胞方案的选择与支架结构及ECM成分密切相关，具有器官／组织特异性。目前，应用于脱细胞支架制备的方法有很多，每种方法各有优势，其选择取决于组织的细胞结构、密度、脂肪含量和厚度。为方便科技工作者选择，对常用的脱细胞因子作如下简介。
1．化学因子（1）酸和碱：酸能水解生物大分子或催化其水解。过氧乙酸是一种常见的抗感染因子，对残留的核酸具有很强的去除作用，而对ECM的影响较小；乙酸会破坏胶原成分，降低ECM的强度，而对硫酸盐黏多糖的影响较小。碱因其完全去除了ECM中的生长因子，严重影响其机械性能，基本只用于早期处理表皮的脱毛。
（2）低渗和高渗溶液：高渗溶液可以分离DNA和蛋白质，低渗溶液可以溶解细胞。为发挥最大作用，经常将低渗和高渗溶液交替使用，但此法耗时长，处理后的组织易水肿，且不能完全溶解掉细胞残余物，还需进一步处理。
（3）洗涤剂：分为离子型、非离子型和两性离子型洗涤剂。通过溶解细胞膜并将DNA从蛋白质中分离，脱细胞效果明显，然而这些洗涤剂会将ECM中的蛋白质成分去除，蛋白质的丢失程度随着洗涤时间的增加而增加。多种洗涤剂同时使用会增加ECM蛋白的丢失，优点是有利于脱细胞之后洗涤剂的去除。与酶相比，非离子型洗涤剂TritonX－100能够更有效的从致密组织中去除细胞成分。离子型洗涤剂十二烷基磺酸钠（SDS）相比于TritonX－100能更好的从致密的组织或器官中去除细胞核成分，同时保持其机械性能；在完全去除细胞核成分中起至关重要的作用，但是会引起一些超微结构的破坏和生长因子的丢失。两性离子型洗涤剂3－［（3－胆固醇氨丙基）二甲基氨基］－1－丙磺酸（CHAPS）对薄的组织（比如肺）作用较强，但是对于较厚的组织，即使与SDS联合使用，脱细胞效果仍然很弱。需要注意的是，脱细胞之后必须将ECM中残余的洗涤剂去除，特别是SDS，它能够穿透入较厚和致密的组织，即使在较低浓度时仍对再种植的细胞显示毒性。
（4）醇类：甘油通过脱水和溶解细胞发挥作用；甲醇和乙醇能使蛋白质沉淀，进而破坏ECM的超微结构。
2．生物因子（1）酶：能够用于脱细胞的酶包括核酸酶、胰蛋白酶、胶原酶、脂肪酶、中性蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和α－半乳糖苷酶，去除细胞成分方面有较高的特异性。然而，用单一的酶来完全去除细胞成分难以达到预期的目的，且残留的酶不利于细胞再种植，并且存在诱发不利免疫应答的可能。核酸酶可以裂解核酸序列，可用于去除残余的核苷酸。胰蛋白酶是一种常用的脱细胞因子，然而，ECM中的蛋白质如胶原蛋白对胰蛋白酶的抵抗能力较弱，因此使用时应格外小心。与洗涤剂相比，胰蛋白酶对弹性蛋白和胶原蛋白破坏力较大，脱细胞速度较慢，但能更好的保护糖胺聚糖。胰蛋白酶脱细胞效果及对ECM的影响程度与时间相关，单独使用胰蛋白酶完整脱细胞需要很长的时间。值得注意的是，胰蛋白酶可以破坏组织的超微结构，有利于后续的脱细胞因子的渗透，因此在初始阶段使用胰蛋白酶可以起到较好的作用，特别是要从一些致密的组织中完全去除细胞核。脂肪酶有协助去脂作用。中性蛋白酶的脱细胞效果较好，但会伴随着ECM更大程度的破坏。（2）非酶因子：螯合物如乙二胺四乙酸（EDTA）和乙二醇双（2－氨基乙基醚）四乙酸（EGTA）有助于细胞从ECM蛋白中分离，但是，单独使用螯合物即使通过振荡也难以将表层细胞脱去。因此，它们经常和酶（如胰蛋白酶）或者洗涤剂联合使用。联合使用螯合物与高／低渗溶液脱细胞的效果尚不明确。3．物理和其他因子（1）温度：冻融技术能有效的溶解组织和器官中的细胞，对组织的超微结构仅有轻微影响。单次冻融可以减少不利的免疫应答，如白细胞浸润；应用多次循环冻融对ECM蛋白的含量影响较小。（2）机械振荡法和压力：机械振荡法可通过振荡产生的能量破坏细胞，多与其他方法联合使用，可将细胞从基底膜分离，然而不可避免的造成超微结构和基底膜完整性的破坏。静水压力所需时间较短，在血管或者角膜组织脱细胞时的效果比洗涤剂或者酶更有效，但是冰晶的形成会影响ECM的超微结构。（3）非热力学打孔技术：使用微秒的电脉冲流经组织或者组织中的剩余细胞，可以诱导产生细胞膜表面的微空隙，从而破坏细胞内微环境，继而导致细胞死亡。由于非热力学打孔技术的探针较小，能用它来脱细胞的组织较小，应用明显受限。
二、脱细胞支架的灭菌
脱细胞支架制备成功后将进行系列体内外实验，在此之前对支架的灭菌十分重要，常使用去除热原法来清除残余的内毒素、病毒和细菌DNA。生物支架可以置于酸或者其他溶剂中以达到灭菌的目的，但是该方法渗透能力不强，且会损伤重要的ECM成分；环氧乙烷对ECM的机械性能影响较大，并引起不利的免疫应答，进而影响移植后正常功能的发挥；γ射线、电子束辐射等灭菌方法会改变ECM的超微结构和机械性能；超临界二氧化碳对ECM和支架的机械性能的影响较其他方法小，目前成为一种替代方法。
三、肝脏脱细胞支架的制备方法
脱细胞器官优良的性能为其成功应用于肝脏带来希望。Shupe等首次报道了啮齿类动物肝脏的脱细胞，通过下腔静脉置管，门静脉切断，上腔静脉结扎，PBS去除血管内剩余血液，依次用浓度为1％、2％、3％的TritonX－100各300ml以5ml／min的速度灌注肝脏，以含0．1％SDS的PBS液300ml冲洗。脱细胞肝脏经HE染色，显示完整的ECM网状结构；免疫组化染色表明Ⅳ型胶原和层黏连蛋白均保留，且胶原存在于基质中，而层黏连蛋白存在于血管的基底膜中。将106个大鼠肝脏前体细胞WB344置于RPMI1640培养基中，通过置管的下腔静脉注入肝脏进行再种植，构建出组织工程肝脏。另有文献报道，经门静脉插管以1ml／min灌注梯度浓度的SDS（0．01％、0．1％、1％）各24h，用蒸馏水灌注15min、1％的TritonX－100灌注30min清除剩余的SDS。PBS冲洗1h后，从门静脉注入染色剂可以清楚地观察到完整的血管结构。将其中一叶置于0．1％的过氧乙酸中灭菌。组织学分析显示，在支架中几乎无细胞核结构；免疫组化分析Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤连蛋白、β1层黏连蛋白，结果表明其在ECM的结构和血管基底膜的完整性方面与正常肝脏相当，DNA含量分析证实支架中DNA低于3％。大鼠来源的肝细胞经门静脉以15ml／min灌入，3D动态培养2周，分别于种植后4h、1、2、5d行组织染色，结果表明4h时，大多数细胞存在于血管内或者血管周围，1d和2d时，细胞离开血管，分布到基质中。该文献首次报道了将肝细胞种植到支架上后白蛋白分泌、尿素合成等功能的发挥，再种植成功的肝脏被移植到单侧肾切除的大鼠体内。Baptista等采用小鼠、大鼠、雪貂、兔和猪，分别经由门静脉插入不同尺寸的导管，通过蠕动泵以5ml／min的速度注入总量约为40倍肝脏体积的蒸馏水，后以1％的Triton－X100和0．1％氨水灌注肝脏去除细胞，最后以蒸馏水去除残余洗脱剂。将人脐静脉内皮细胞和人胚胎肝细胞种植到肝脏支架中，同时通过门静脉以3ml／min循环灌注RPMI1640培养基16h，首次证实了人肝细胞前体细胞具有在脱细胞肝脏支架上生存的潜力。功能测定显示，培养液中的尿素和白蛋白水平明显高于单纯将人胚胎肝细胞置于培养液中的方法。另有文献报道一种改良的脱细胞方法，以RPMI1640培养基灌洗10min，再用混有SDS的磷脂酶A2冲洗30－60min，直到组织透明，流出液澄清，再以高渗盐水及核酸酶分别冲洗，直到灌洗液在280nm及260nm的吸光度皆呈阴性，最后以RPMI1640培养基冲洗2h，所制备支架具有将肝脏前体细胞分化成肝细胞和胆管上皮细胞的能力。然而，上述文献都仅限于啮齿类动物，Barakat等采用新的方法制备猪脱细胞支架，并进行人肝细胞种植：以SDS进行去细胞，右前叶作为种植细胞的支架，含有肝细胞生长因子的胚胎肝细胞和胚胎星状细胞作为种植细胞，灌注液中含有肝细胞生长因子和其他所需营养物质，通过测量灌注过程中氧分压、二氧化碳分压、乳酸、葡萄糖、尿素氮和白蛋白量进行肝脏代谢和合成功能的评估。结果表明，再生的肝脏呈现活跃的代谢能力，并保留白蛋白的合成能力，种植细胞分化为成熟的肝细胞。因此，ECM对于细胞的种植至关重要，具有支持细胞生长、促进前体细胞特异性分化的作用。Hammond等通过将肝脏脱细胞支架移植到正常肝脏和部分肝切除的肝脏中，证实了这一观点。首要的观察指标为肝细胞DNA的合成和肝组织渗透进入支架的程度；其次的观察指标为非实质细胞的DNA合成、肝重量的测定、肝功能测定以及移植物周边的细胞生长情况。结果令人振奋，支架种植到正常肝脏4d后，支架周边有更多的肝细胞增殖，7d后更多的肝脏组织渗透进入支架中；部分肝切除术后2d，种植支架的肝脏较单纯部分肝切除的肝脏有更多的肝细胞增殖。
四、前景与展望
1.1金属元素
有研究发现，某些重金属，比如锰的慢性中毒可损害中枢神经系统，特别是纹状体和苍白球等部位，产生类似PD的锥体外系神经功能障碍。Guilarte等及Huang的研究也发现锰中毒与PD有着密切的联系。Park发现电焊工及其他长期暴露于锰的工人存在着出现神经症状和罹患PD的危险性。Moberly等的研究还表明，锰可以通过作用于嗅球和基底神经节的多巴胺能神经元来影响神经介质的释放，从而导致PD等锥体外系疾病的发生。Coon等利用K-XRF技术测量了慢性暴露条件下铅在人体内的沉积量，并表明长期的铅暴露与PD发病风险成正相关。Komatsu等证实了锰、铁、铅、镉、铝等金属在体内的沉积会导致氧化应激的增加，从而引起PD的发生。
1.2农药百草枯
对多巴胺系统具有神经毒性作用，从而导致PD样症状和改变。Betarbet等利用鱼藤酮复制出了类似PD的大鼠模型，其症状包括出现震颤、步态不稳等。某些PD患者的脑组织中所含有机氯农药，如林丹、狄氏剂的水平明显高于对照组。代森锰（一种杀真菌剂）也被报道与PD的发生相关。还有研究发现，有机磷农药同样与PD的发病相关。
1.3环境毒素
1983年，美国有人吸食了含有1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）的海洛因后出现了典型的PD症状和病理学改变，研究者受到启发用灵长类复制了MPTP的PD动物模型。研究人员经过实验证实，MPTP对多巴胺能系统具有神经毒性从而导致PD样症状和改变。此后，MPTP的PD模型开始被应用于试验中。另外，Shepherd等发现，MPTP还可明显增强百草枯对多巴胺能系统的损害。
1.4其他因素
PD的发病还与很多种因素相关。有学者经过研究发现，摄入过多的脂肪，罹患PD的概率也会增加。Miyake等发现摄入花生四烯酸和胆固醇会增加PD的发生概率。Kyrozis等通过对希腊人饮食习惯的研究发现饮用牛奶也和PD发病有关。Kotagal等发现高血压等心血管危险因素与PD发生具有一定相关性。Aryal等还发现，四氢生物蝶呤（BH4）等增加会导致PD初期病情的恶化。Willis等发现居住环境与PD的发生也有一定关系。
2PD发病机制的研究手段及应用进展
2.1概况
当前的PD研究手段包括动物模型，细胞模型和iPScs模型等。动物模型为PD发病机制最早的研究方式。Maneuf等早在20世纪50年代就通过对啮齿类动物注射利血平的方法使其产生类似人类的PD样症状。此后研究者们又相继积极研发出了6-羟多巴胺模型，百草枯模型等。基因敲除和转基因小鼠模型在PD研究中也有应用。细胞模型包括肾上腺嗜铬瘤细胞系（pheochromocytomacells，PC12）细胞模型，SH-SY5Y细胞模型等。大脑结构复杂性的缺乏和较短的模型寿命意味着小鼠等动物模型难以详尽地阐释人类的疾病，细胞模型也并没有可靠地显示出在PD患者身上所观察到的缓慢的疾病进程。近几年，新兴的iPScs技术，将来源于PD病人的iPScs可分化为中脑多巴胺能神经元，在体外模拟其生理特性，可方便研究人员在更接近人体内环境的条件下研究PD的发病机制。
2.2iPScs技术的发展
iPScs技术是干细胞领域近几年来比较热门的一种新兴干细胞技术。该技术通过病毒载体或其他特异载体将特定转录因子的组合转入到被诱导细胞中，进而将已分化的体细胞重编程为未分化的多能细胞。2006年Takahashi成功将小鼠成纤维细胞重编程为与胚胎干细胞特征相似的诱导性胚胎干细胞，即iPScs。他利用逆转录病毒将4个与多能性相关的基因Oct-4、Sox2、Klf4、c-Myc组合导入被诱导细胞，再经过多能性分子Fbxl5筛选，从而得到在多方面与胚胎干细胞很相似的多能性细胞。随后成功诱导出iPScs。2008年Nakagawa研究小组使用了Oct3/4、Sox2、Klf43个基因，避免了原癌基因c-Myc的插入使得iPScs更安全化，利用Nanog代替Fbx15作为筛选标记，从而进一步提高了筛选的特异性。2009年，Woltjen研究小组以转位子为载体代替了逆转录病毒，所得到的iPScs避免了病毒基因的顽固表达和插入突变等风险，从而使得临床应用风险进一步大大降低。另外，直接将重组蛋白质导入体细胞以及利用合成mRNA进行转染等方法也显著降低了突变的危险性。有报道称体细胞可以通过小分子复合物而不依靠病毒来实现重编程。还有研究者发现毛猴素，二甲基五羟色胺和D4476可作为Oct3/4的化学替代品。随着研究的深入，iPScs技术愈加成熟，不断进展的诱导iPScs的方法既可有效消除重编程造成的种种潜在危险，又可以简单快速地获得iPScs。
2.3利用iPScs技术进行环境、职业致病因素
诱导PD发病机制的相关研究由于环境因素和遗传因素相互影响的复杂性，环境职业因素对PD作用相关的研究具有一定难度。Aboud等以无PD遗传危险因素者为对照组，以PARK2等位基因功能缺失且具有PD家族史但是还未出现症状者为实验组建立了观察锰神经毒性差异的iPScs模型。来源于实验组和对照组的真皮成纤维细胞的iPScs被分别诱导分化为早期神经神经前体细胞。经过测定发现两组神经前体细胞在对锰毒性的敏感性和线粒体分裂等方面几乎没有差别，但是实验组与对照组相比，活性氧显著升高。经过测定发现实验组与对照组相比，锰在细胞内的沉积明显减少，表明在锰沉积率相同的条件下实验组神经前体细胞对于锰毒性的敏感性比对照组高。但是锰沉积明显减少的原因是否与PARK2突变有关尚不清楚。Kikuchi等将人体iPScs来源的的神经前体细胞在无血清、无饲养层条件下培养至28d和42d后分别定向性植入MPTP处理过的猴子双侧豆状核，植入6个月后。磁共振成像（MRI）图像显示移植的细胞在猴子的大脑中存活增殖。由于MRI图像与猴子脑片苏木精-伊红染色的结果具有一致性，他们利用MRI来观察移植细胞的增殖情况。培养至28d的移植细胞增殖迅速，而培养至42d的移植细胞增殖相对缓慢。他们还发现移植后1~3个月的细胞倍增时间明显短于3~6个月，说明细胞的增殖能力在后期开始下降，但至少可以在猴脑内存活6个月以上。他们又通过描述行为评定量表发现移植后猴子的行为较之前发生了一些进步，表明人体iPScs在未来临床试验中的治疗潜力。Deleidi等通过逆转录病毒将人类KLF4，SOX2，OCT4和c-MYC导入恒河猴皮肤成纤维细胞，获得iPScs后进一步将其诱导为多巴胺能神经元细胞并植入6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的小鼠PD模型的纹状体，移植细胞在移植16周后进行组织分析发现具有酪氨酸羟化酶阳性细胞，且小鼠的纹状体中显示出神经的再生现象。他们还发现这些动物的同侧旋转行为等在移植后均有所恢复，而且移植6个月后这些小鼠既没有产生肿瘤，也没有发生炎症反应，进一步证实了iPScs在PD等神经退行性疾病在临床治疗方面的安全性。Chang等的研究证实了二十二碳六烯酸处理过的iPScs来源的多巴胺能神经元前体细胞植入到6-OHDA诱导的小鼠PD模型体内，小鼠的症状在4个月后得到了一定的缓解。Peng等将来源于iPScs的神经多巴胺能神经元建立起1-甲基4-苯基吡啶离子（MPP+）模型和鱼藤酮的PD体外模型，对44种可能对PD有治疗作用的药物进行了两轮筛选，并利用具有神经保护作用的神经营养因子作为阳性对照。经过MPP+的初筛和确认筛检，他们发现其中16种药物对于MPP+诱导的神经细胞死亡显示出神经保护作用，并利用MPP+模型建立起了这16种药物的剂量反应曲线。经过鱼藤酮模型的筛检他们更加明确了这些药物对于鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡确实具有一定的保护作用。这种方法可以应用于可能具有临床疗效的PD药物的检测来缩短药物进入临床的时间，并可增加临床实验成功的可能性和个体化治疗的可能性，为明确药物疗效提供了良好的平台。
2.4iPScs技术
最近新发现的肌腱源性干细胞（TDSC）因在肌腱组织中的修复潜能而逐渐获得重视，但目前其对损伤肩袖腱－骨界面愈合作用机制研究鲜有报道。既往研究证实，TDSC具有向软骨、骨分化的潜能，因此其在损伤肩袖腱－骨界面愈合过程中可能扮演着中介作用。Shen等提取兔肩袖组织TDSC并进行培养，用于异体兔肩袖修复，结果显示12周后实验组腱－骨界面结构及生物力学指标均优于对照组，认为异体TDSC可增加肩袖胶原沉积，且可分泌抗炎因子以避免免疫排斥反应。Randelli等提取肩袖及肱二头肌腱组织TDSC并进行培养，比较TDSC与BMSC成骨细胞、脂肪细胞、肌骨骼细胞分化，结果显示TDSC具备很好的分化潜能，且优于BMSC。Tsai等的研究获得了与此相同的结果，还发现肩袖来源干细胞可表达种系特异性基因如成骨诱导的Runx2及骨钙蛋白、成脂分化的过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）－γ和脂蛋白脂肪酶（LPL），成软骨分化的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原α1基因。Cheng等对肿瘤坏死因子－α刺激基因（TSG）－6在TDSC促进肩袖腱－骨愈合过程中的作用进行实验研究，结果显示TSG－6为保护性炎性反应性基因，在多种炎症性疾病或类似炎症过程中呈高表达，参与细胞外基质重塑，调节蛋白酶网络，在多种关节炎中有限制炎症、保护软骨的作用；认为TSG－6在TDSC促进损伤肩袖腱－骨界面愈合过程中具有良好的调控作用。然而，目前仍存在TDSC含量较少、难以完全分离和纯化、缺乏特异性表面标志物等问题，且TDSC体外诱导分化定向诱导机制尚不清楚，因此还需进一步研究。
2骨膜源性干细胞
骨膜可分为内、外两层，外层致密，有许多胶原纤维束穿入骨质，使之固定于骨面；内层疏松，可产生骨膜源性干细胞（PDSC）、成骨细胞及破骨细胞等。来自内层的PDSC具有一定的分化潜能，因此被认为可能在肩袖损伤愈合过程中具有一定的促进作用。Chen等从大鼠胫骨骨膜组织中提取PDSC并进行培养，将其与骨形态发生蛋白（BMP）－2制成凝胶混合物，采用该混合物对大鼠损伤肩袖进行修复，术后4、8周进行大鼠修复肩袖腱－骨界面组织学及生物力学分析，结果显示实验组最大腱－骨界面实效负荷明显高于对照组，且差异有统计学意义，免疫组化显示实验组修复界面存有聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白，认为PDSC与BMP－2的混合物可很好地促进腱－骨界面纤维软骨形成。目前大量实验将PDSC用于修复软骨缺损、骨缺损及骨不愈合，但其用于损伤肩袖腱－骨界面的修复鲜有报道，因此PDSC如何在重建腱－骨界面结构中发挥作用，仍需进一步研究。
3脂肪源性干细胞文献报道
脂肪源性干细胞（ADSC）与BMSC具有相似的分化潜能，其在合适的诱导剂作用下可分化为脂肪细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞、成骨细胞和神经元样细胞。此外，ADSC具有数量巨大、获取方便、诱导安全、增殖迅速等特点，是一类有广阔应用前景的成体干细胞。Oh等采用ADSC修复兔慢性肩袖损伤模型，先切断兔肩胛下肌腱，6周后形成慢性损伤，此时进行肩袖修复，同时将ADSC注射入肩袖腱－骨区域及脂肪浸润的肩袖肌肉组织内以对肩袖进行加强修复，6周后从生物力学、肌电学、组织学方面对修复结果进行分析，认为ADSC可促进损伤肩袖腱－骨愈合，与对照组相比，实验组肌肉组织脂肪浸润区域明显较小。Kim等对兔亚急性肩袖损伤（切断冈上肌3周）修复的同时，将ADSC注射入邻近肌腹－肌腱移行部，术后3周观察类胰岛素样生长因子－Ⅰ受体（IGF－ⅠR）及肌球蛋白重链（MyHC）在注射部位的表达，结果显示实验组IGF－ⅠR及MyHC表达明显高于对照组（注射生理盐水组），认为ADSC促进损伤肩袖修复有可能是通过IGF－Ⅰ信号转导通道完成的。虽然以上研究提示ADSC对退变性肩袖损伤具有促进愈合作用，但已往大部分研究均认为ADSC自我更新能力较差，不宜作为种子细胞。因•46•此，目前急需寻找更好的诱导剂，使其能更有效地分化成为目标组织，从而更好地促进损伤肩袖腱－骨界面愈合。
4肌源性干细胞体内研究显示
肌源性干细胞（MDSC）具有自我更新与多向分化潜能的特性，可再生为骨、软骨、肌肉、血液、神经及心脏组织。近期有研究报道MDSC同时具有肌腱组织的分化能力，但用于修复损伤肩袖研究鲜有报道。Pelinkovic等将MDSC用于修复裸鼠损伤冈上肌腱并进行观察，结果7d后细胞核呈纺锤形并集成肌腱胶原束，3周后检测到β－半乳糖苷酶基因表达，表明MDSC分化成表达波形蛋白的成纤维细胞，提示肩袖肌腱基质及原始细胞开始调控注射的MDSC向成纤维细胞分化；认为MDSC因具有分化为成纤维细胞的能力而可用于肌腱愈合组织工程及肩袖损伤治疗。
5滑囊源性干细胞滑囊源性
干细胞因肩峰下滑囊与肩袖紧邻而被认为有可能对肩袖修复产生一定的积极作用。Utsunomiya等将关节镜下提取的人肩峰下滑囊组织进行滑囊源性干细胞提取及培养，结果显示肩峰下滑囊组织可作为生物修复肩袖损伤良好的干细胞来源；将其与肩袖残端、滑膜组织中提取的干细胞进行成骨化及扩展性比较，结果显示滑囊源性干细胞具有最佳的扩展性及成骨性。Song等对在肩袖修补术中取出的部分肩峰下滑囊组织进行滑囊源性干细胞提取及培养，并用流式细胞仪对其进行分辨，排除造血干细胞及PDSC，再将此滑囊源性干细胞放于陶瓷支架中并将其植入裸鼠体内，其中部分用BMP－12予以刺激分化，最终支架区域出现包含胶原蛋白的腱样组织；因此认为，作为新型来源的干细胞，滑囊源性干细胞具有腱性组织分化潜能，而BMP－12对该过程具有一定的促进作用，滑囊源性干细胞有可能在肩袖损伤治疗中产生积极作用。肩峰下滑囊组织经肩关节镜手术取材方便，对肩袖修复无影响，但目前滑囊源性干细胞实验研究较少，仍处于起步阶段，其促进损伤肩袖愈合及进行定向诱导机制仍需进一步研究。
6结语
1.1一般资料
患者的入选是根据美国胸科协会制定的诊断指南，存在大于3周以上的咳嗽症状，有至少一条哮喘症状，并且体格检查出现相应体征的儿童患者随机纳入研究，研究时间从2012年1月～2014年6月。
1.2方法采用
流式细胞术。所收集样本冷冻保存，统一检测，末梢血样采集于肝素钠抗凝管中，取100μL血样加入中含有20μL白介素-3的缓冲液中，室温孵育10min，然后加入100μL儿童哮喘患者或健康对照组的血清，室温孵育20min，其中缓冲液包含0.12MNaCI，0.005MKCI，0.025MTris，pH7.6。N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP0.4mmol/L）（Sigma-Aldrich公司，圣路易，MO，USA），一种非特异性细胞活化剂，被用于阳性对照，洗涤缓冲液（0.01M磷酸缓冲盐水包括0.01M的磷酸二氢钠，0.01M磷酸氢二钠，pH为7.2～7.4）被用于阴性对照。孵育结束后将样品置于冷却的冰上防止嗜碱性粒细胞活化和降解，继而与荧光FITC结合的抗CD63抗体孵育BectonDickinson，FranklinLakes，NJ，USA），与荧光PE结合的抗IgE抗体（Pharmacia，Uppsala，Sweden），以及PerCP结合的抗CD45抗体（BectonDickinson）避光孵育20min，加入红细胞溶解液。2500rpm离心10min，将沉淀用缓冲液悬浮，BDFACSCantoⅡ流式细胞仪进行分析。在采集过程中，红色荧光（FL2）和前向散射（FSC）和侧向角散射（SSC）的特点是采用至少1000嗜碱性粒细胞的表达高IgE介导的面密度的选框进行分析，使用FSC/SSC特性淋巴细胞的定义。然后，从这些细胞，FL3/FL2图上嗜碱性粒细胞的认定为CD45低/IgE的高表达。
1.3统计学方法
使用SPSS®软件进行统计分析（SPSS公司，芝加哥，IL，美国）。x2检验用于比较患者组和对照组之间各个受体的表达情况。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
共纳入研究的哮喘儿童有72名，健康对照组32例。嗜碱性粒细胞的识别依赖表面受体的CD45的低表达和IgE的高表达，CD63的表达可用于识别嗜碱性粒细胞是否被患者或者健康对照组的血清激活。接受来自非过敏的健康志愿者的血清刺激后，抗FcεRI的自身抗体CD63的表达数目和比例如表1所示。29/78（37.2％）的哮喘患者血清表达CD63+的嗜碱性粒细胞，CD63+嗜碱性粒细胞的人数比例是为（36.9±8.3）％。与此相反，在健康组中的血清只有4/32（12.5％）对照表明CD63+嗜碱性粒细胞和嗜碱性粒细胞的“x±s”的比例人口，这是CD63+为（26.3±5.6）％。哮喘中的比重差患者与健康的比例。有CD63+嗜碱性粒细胞的对照组差异有统计学意义（P＜0.05）。
3讨论
