低频电磁场对两种不同支架培养的表皮干细胞增殖的影响

摘要：目的观察低频电磁场（LFEMF）对三维环境中培养的人表皮干细胞（ESCs）增殖的影响，为LFEMF用于皮肤组织工程提供实验依据。方法取人包皮来源的ESCs作为种子细胞，利用Ⅳ型胶原快速贴壁法体外分离纯化ESCs，并种植于胶原海绵和壳聚糖支架材料，外加LFEMF治疗仪（场强5mT，频率分别为1Hz、10Hz和50Hz）刺激ESCs（30min／d），用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测支架材料细胞毒性，通过肉眼、HE染色后DAPI荧光核染色后镜下观察及扫描电镜观察ESCs生长情况，并收集培养2，7，10，14dESCs的DAPI核荧光染色数据，用显微图像软件分析细胞增殖数目，比较各时间点细胞增殖的区别。结果LFEMF促进ESCs增殖的作用在不同频率组间的差异和两种支架上培养的ESCs增殖情况的差异均有统计学意义（P〈0．01），10d后胶原海绵支架上细胞增殖较壳聚糖支架上的细胞明显（P〈0．05），各频率组LFEMF刺激均能促进ESCs增殖，频率不同，促增殖的效应不一（P〈0．05）。结论胶原海绵可较好地作为体外培养ESCs的支架，在LFEMF干预下可实现ESCs体外三维环境中较快扩增，LFEMF在皮肤组织工程中具有较大应用潜力。