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重组人pEGFP—heNOS质粒转染人内皮祖细胞及其条件优化

作者:廖传军 郭连瑞 杨宝钟 张望德 首都医科大学附属北京朝阳医院血管外科 北京100020 首都医科大学宣武医院血管外科

摘要:目的用脂质体介导重组人pEGFP—heNOS质粒转染人内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC),并对其转染条件优化以获得较高转染效率。方法脂质体介导重组人pEGFP—heNOS质粒转染人骨髓来源的内皮祖细胞,改变质粒及脂质体剂量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染48h后逆转录聚合酶链反应(RT~PCR)和Westernblot方法检测heNOS基因在内皮祖细胞中的表达。结果重组人pEGFP—heNOS质粒体外成功转染入人内皮祖细胞中,质粒:脂质体为1:1时转染效率最高。结论成功地将重组人pEGFP—heNOS质粒体外转染入内皮祖细胞中,通过优化转染条件提高了转染效率,为下一步基因治疗提供了试验基础。

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