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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建

作者:李慧春; 陈鹏飞; 李先斌; 丁思嘉; 王康; 张文超; 杨德强; 李林; 徐晶晶; 虞凌雪; 姜一峰; 高飞; 于海; 童光志; 周艳君 中国农业科学院上海兽医研究所; 上海200241; 上海交通大学农业与生物学院; 上海200240; 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 扬州225009

摘要:猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrierDNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECscDNA文库其库容量为1.3×10^8pfu/mL,插入cDN段长度为250~2500bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECscDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。

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中国动物传染病学报

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国际刊号:1674-6422

国内刊号:31-2031/S

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