珠子参实时荧光定量PCR体系的建立与优化

摘要：实时荧光定量PCR是一种快速用于鉴定基因表达量的方法,广泛用于微生物、植物和动物基因表达分析中。通过选取合适的内参基因β-actin构建珠子参实时荧光定量PCR体系,为珠子参及其近缘种的基因表达分析奠定基础。主要从两个最基本的要素进行体系优化,即引物浓度和模板浓度。优化先从模板浓度开始,设置模板浓度梯度分别为120ng/μL、24ng/μL、4.8ng/μL、0.96ng/μL、0.192ng/μL,基于扩增曲线和扩增效率的计算,得出扩增效率最高的一组,即为最优模板浓度。然后进行引物浓度优化,在最优模板浓度基础上设计一系列的引物浓度分别为10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L、1.25μmol/L、0.625μmol/L,基于扩增曲线和扩增效率,确定最佳的引物浓度。实验结果表明,当模板浓度为120ng/μL,引物浓度为10μmol/L时PCR的扩增效率最高。在珠子参中首次建立和优化了以β-actin基因作为内参基因的实时荧光定量PCR体系。