miR-27a对胃癌细胞凋亡影响的体外研究

摘要：目的：探讨miR-27a对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制.方法：分别构建miR-27a过表达和敲除FOXO1的SGC-7901细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.蛋白质印迹法（Westernblot）检测细胞凋亡和自噬相关蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同时检测上调及下调miRNA-27a的胃癌细胞FOXO1的表达水平.双荧光素酶报告基因分析法验证miR-27a的靶基因.实时聚合酶链式反应（RealtimePCR）检测miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒的转染效率,并检测过表达/敲低miRNA-27a的胃癌细胞中FOXO1mRNA的水平.结果：（1）上调miR-27a的细胞凋亡率较对照组明显下降,且凋亡相关蛋白BCL-2表达上调,p53水平下降,自噬相关蛋白LC3I、LC3II的表达较对照组下调（P〈0.05）.而敲低胃癌细胞中FOXO1后得到了与上调miR-27a相似的实验结果.（2）双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-27a与FOXO1存在靶点关系.miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒分别成功转染至胃癌细胞中.上调或下调胃癌细胞中miR-27a后,SGC-7901细胞中FOXO1mRNA水平无明显变化（P〉0.05）,FOXO1基因表达在蛋白水平相应下调或上调.结论：体外实验中,miR-27a可通过靶向抑制FOXO1的表达抑制胃癌细胞凋亡,miR-27a/FOXO1轴可以为胃癌治疗提供新的策略.