肺炎克雷伯氏菌漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达
作者： 工业发酵微生物教育部重点实验室; 天津市工业微生物重点实验室; 工业酶国家工程实验室; 天津科技大学生物工程学院; 天津300457
摘要：以肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)基因组为模板,通过PCR扩增得到其漆酶基因lac;基于毕赤酵母密码子偏爱性优化后,得到新型漆酶基因lacm;将其与大肠杆菌-毕赤酵母(E.coli-P.pastoris)穿梭表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-lacm;将该质粒转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,实现该漆酶的胞外分泌表达,发酵液中重组漆酶(rLACM)活力达0.37U/mL.经对rLACM酶学性质分析表明:rLACM的最适温度为70℃,最适pH为8.0,在30~70℃、pH5.0~9.0活力稳定.
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