携带EGFP绿色荧光蛋白标记的腺病毒的构建及其在293A细胞中的包装与表达

摘要：目的:构建显示EGFP绿色荧光蛋白的腺病毒质粒,在293细胞中包装表达重组腺病毒颗粒。方法:以p Eentry-Ghrh-P2A-EGFP为模板,双酶切出目的基因EGFP,将其与腺病毒穿梭载体Pentry-Trcp1连接为p Eentry-P2A-EGFP质粒;腺病毒骨架载体质粒PAd-DEST再与p Eentry-P2AEGFP质粒同源重组为PAd--P2A-EGFP质粒;用PEI介导转染将PAd--P2A-EGFP质粒转染到293A细胞,包装成重组腺病毒颗粒。结果:PAd--P2AEGFP转染到293A细胞中,合成荧光蛋白,荧光显微镜下细胞发绿色荧光。再次感染293A细胞,90%以上的细胞脱落,并且能见到绿色荧光。结论:显示EGFP绿色荧光蛋白的腺病毒载体构建成功,并能在293A细胞中完整包装成重组腺病毒颗粒,为研究腺病毒载体特性提供参考依据。