CRISPR/Cas9介导下高效敲除SQSTM1/p62基因的Hela细胞模型的建立

摘要：目的:探讨针对p62双sgRNA向导CRISPR/Cas9基因编辑效率。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除p62基因,通过细胞有限稀释法和嘌呤霉素筛选,免疫印迹法验证双sgRNA和单sgRNA向导的基因编辑成功率;流式细胞仪验证p62缺失对Hela细胞凋亡的影响。结果:免疫印迹分析得出双sgRNA导向的p62敲除效率高于单sgRNA导向的敲除,靶序列测序比对分析确认p62编码基因发生大片段缺失突变。H2O2处理稳定敲除的Hela细胞系显示,p62基因敲除能明显抑制Hela细胞H2O2诱导的早期细胞凋亡。结论:成功建立了p62敲除的Hela细胞系,双sgRNA向导的CRISPR/Cas9基因编辑体系可能是一种更有效的编辑工具。