【摘要】 目的 研究异黄酮苷元滴丸和片剂的药动学及相对生物利用度。方法 以sd大鼠为实验动物，采用高效液相色谱法测定异黄酮苷元滴丸和片剂单剂量灌胃给药后大鼠的血药浓度变化。用3p97软件进行药代动力学数据处理， 计算 分析药代动力学参数和相对生物利用度。结果 异黄酮苷元滴丸：auc为46.30 μg·min·ml-1，cmax为0.89 μg·ml-1，tmax为18.03 min;片剂：auc为36.01 μg·min·ml-1，cmax为0.41 μg·ml-1，tmax为31.43 min，滴丸相对于片剂的相对生物利用度为128%。结论 异黄酮苷元滴丸、片剂均符合一室模型，滴丸较片剂具有较高的生物利用度。本研究为异黄酮苷元滴丸研制提供了一定的依据。
【关键词】 异黄酮苷元滴丸;异黄酮苷元片剂;高效液相色谱法;药代动力学;相对生物利用度
abstract:objective to investigate the pharmacokinetic and relative bioavailability of isoflavone aglycone dripping pills and tablets in healthy sd rats,and evaluate the pharmacokinetic effects of the two dosage forms of isoflavone aglycone. methods 36 sd rats were intragastrically administered with the suspension solution of isoflavone aglycone dripping pills and tablets at single dose,and changes in plasma concentration were determined by hplc. pharmacokinetic data were processed with 3p97 software and the pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated. results for dripping pills of isoflavone aglycone:auc=46.30 μg·min·ml-1,cmax=0.89 μg·ml-1,tmax=18.03 min; and for tablets of isoflavone aglycone:auc=36.01 μg·min·ml-1，cmax=0.41 μg·ml-1，tmax=31.43 min. the relative bioavailability of dripping pills and tablets was 128%. conclusion the pharmacokinetics of dripping pills and tablets of aglycone isoflavone were in accordance with single compartment model，and the relative bioavailability of dripping pills of aglycone isoflavone was higher.
key words:isoflavone aglycone drippping pills; isoflavone aglycone tablets; hplc; pharmacokinetics; relative bioavailability
异黄酮苷元(isoflavone aglycone)是一种来源于豆类植物的游离苷元，包括染料木素、黄豆苷元、黄豆黄素3种活性成分，其中染料木素的结构与雌二醇相似，且含量最高，生物活性最强[1]。wWw.133229.coM异黄酮苷元是一种具有较强的抗氧化活性和神经保护作用的植物雌激素，在防治老年性痴呆和由于雌激素缺乏导致的骨质疏松等方面有良好的应用前景[2]。但异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低，影响了其在体内的生物活性。本实验通过考察自制异黄酮苷元滴丸[3]和片剂[4,5]的药代动力学特征，为异黄酮苷元滴丸的临床应用提供依据。
广东药学院学报 第25卷 第6期 杨红,等.异黄酮苷元滴丸和片剂在大鼠体内的相对生物利用度研究
1 材料与仪器
1.1 材料
异黄酮苷元滴丸和片剂是由本实验室从大豆中提取制备的游离苷元研制而成(平均丸重25.03 mg·丸-1，染料木素含量为133.2 mg·g-1;平均片重453.84 mg·片-1，染料木素含量为5.40 mg·g-1);染料木素对照品(上海同田生化技术有限公司);无水甲醇(分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司);磷酸(分析纯,沈阳 经济 技术开发区试剂厂);甲醇(色谱纯,tedia公司);异黄酮苷元滴丸灌胃液(精确称取0.05 g滴丸细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);异黄酮苷元片剂灌胃液(精确称取1.234 g片剂细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);其余试剂均为分析纯。
1.2 动物
sd大鼠36只，鼠龄8～12周，体质量(200±10)g，广州中医药大学实验动物中心，许可证号：scxk(粤)20080020，粤监证字2008a002。
1.3 仪器
p680a高效液相色谱仪(美国戴安公司);re52cs旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);低sh2d循环水试真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);数显恒温水浴锅(江苏省宏华仪器厂);xw80型旋涡混合器(上海第一医学院仪器厂);高速离心机(日本日立公司)。
2 实验方法
2.1 对照品溶液的制备
取空白血浆6份,分别精密加入染料木素对照品制得质量浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.60 μg·ml-1的对照品溶液，4 ℃保存备用。
2.2 色谱条件
参照 文献 [6,7]进行改进：色谱柱为diamonsil c18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);柱温为25 ℃;流动相为甲醇0.3%磷酸溶液(体积比48∶52);流速为0.7 ml·min-1;测定波长为254 nm;进样量为20 μl。
2.3 血浆样品预处理
取血浆1 ml， 加入1 ml乙酸乙酯， 涡旋振荡
2 min，3 000 r·min-1离心5 min，移取上层有机相于另一试管中;将下层溶液重复上述步骤，合并有机相溶液，通风橱中挥干，残留物加无水甲醇溶解，0.45 μm微孔滤膜过滤，用无水甲醇定容于2 ml容量瓶，得血浆样品溶液。
2.4 方法专属性
在“2.2”项色谱条件下，测得空白血浆、对照品血浆(含染料木素)、样品血浆(含异黄酮苷元)的色谱图见图1。从图1可见，血浆中的杂质不干扰测定。
2.5 标准曲线[8]
取“2.1”项下的对照品溶液，按“2.3”项下处理并进样测定，以染料木素溶液的质量浓度为横坐标,相对应的染料木素的峰面积为纵坐标,用最小二乘法进行线性回归 计算 ，得回归方程为y=3272.06 x-1.87，r=0.999 9。表明染料木素对照品的质量浓度在0.05～1.60 μg·ml-1(n=6)范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取空白血浆1.0 ml，按“2.3”项下处理，制得高、中、低3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的样品溶液，分别于1 d内和3 d内连续进样5次测定，并计算rsd值，结果见表1。表1 精密度试验结果
2.7 相对回收率试验
精密吸取血浆样品3份，按“2.3”项下操作处理，得血浆样品溶液并根据标准曲线计算样品溶液浓度，将所得浓度与实际浓度的比值即相对回收率，见表2。表2 相对回收率结果
2.8 稳定性考察
取“2.1”项下的3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样分析，结果显示溶液中染料木素的rsd为0.83%，表明样品溶液在4 ℃避光条件下12 h内稳定。
2.9 血浆样品测定
取sd大鼠36只，随机分成2组，隔夜禁食，分别灌胃给予异黄酮苷元滴丸灌胃液或异黄酮苷元片剂灌胃液(2 ml·只-1),于灌胃后0、5、10、15、30、45、60、75、90、105、120、150 min对大鼠进行眼眶取血(约1.5 ml·只-1)， 置肝素试管中抗凝， 5 000
r·min-1离心5 min，分离上清液，得血浆样品。按“2.3”项下方法处理得到血浆样品溶液并进行测定，利用回归方程求出血药浓度。
3 结 果
3.1 血药浓度测定结果
按不同时间点求出平均血药浓度，并绘制血药浓度-时间曲线，见图2、3。由图可见：15 min时滴丸的血药浓度为0.706 μg·ml-1，片剂的血药浓度为0.405 μg·ml-1，相比其他时间点，此采血点的血药浓度最高。
3.2 药动学参数
血药浓度数据经药代动力学软件3p87拟合处理后，药动学参数结果见表3。从表3可见：异黄酮苷元滴丸和片剂均符合一室模型;滴丸和片剂的主要药代动力学参数具有明显的差别，滴丸在18.03 min时达到血药浓度峰值0.89 μg·ml-1，而片剂出现2个峰值，分别在15 min和75 min，血药浓度峰值为0.41 μg·ml-1和0.365 μg·ml-1;滴丸的auc为46.30 μg·min·ml-1，而片剂的为36.01 μg·min·ml-1，滴丸的相对生物利用度约为片剂的128%。表3 异黄酮苷元滴丸和片剂药代动力学参数
4 讨 论
异黄酮苷元具有苯并吡喃酮结构，有较强的紫外吸收，3种活性成分均难溶于水[9]，影响了其在体内的吸收利用。本实验对自制异黄酮苷元滴丸和片剂的药代动力学特征和生物利用度考察，结果显示滴丸的血浆药物浓度-时间曲线为单峰，而片剂表现为双峰，说明片剂可能在大鼠体内存在肝肠循环;异黄酮苷元滴丸生物利用度为片剂的1.28倍，说明滴丸可显著改善和提高异黄酮苷元在体内吸收和代谢，在一定程度上解决了异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低的问题。本文结果为进一步的体内研究提供了依据。
【 参考 文献 】
【摘要】 目的 研究异黄酮苷元滴丸和片剂的药动学及相对生物利用度。方法 以sd大鼠为实验动物，采用高效液相色谱法测定异黄酮苷元滴丸和片剂单剂量灌胃给药后大鼠的血药浓度变化。用3p97软件进行药代动力学数据处理， 计算 分析药代动力学参数和相对生物利用度。结果 异黄酮苷元滴丸：auc为46.30 μg·min·ml-1，cmax为0.89 μg·ml-1，tmax为18.03 min;片剂：auc为36.01 μg·min·ml-1，cmax为0.41 μg·ml-1，tmax为31.43 min，滴丸相对于片剂的相对生物利用度为128%。结论 异黄酮苷元滴丸、片剂均符合一室模型，滴丸较片剂具有较高的生物利用度。本研究为异黄酮苷元滴丸研制提供了一定的依据。
【关键词】 异黄酮苷元滴丸;异黄酮苷元片剂;高效液相色谱法;药代动力学;相对生物利用度
abstract:objective to investigate the pharmacokinetic and relative bioavailability of isoflavone aglycone dripping pills and tablets in healthy sd rats,and evaluate the pharmacokinetic effects of the two dosage forms of isoflavone aglycone. methods 36 sd rats were intragastrically administered with the suspension solution of isoflavone aglycone dripping pills and tablets at single dose,and changes in plasma concentration were determined by hplc. pharmacokinetic data were processed with 3p97 software and the pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated. results for dripping pills of isoflavone aglycone:auc=46.30 μg·min·ml-1,cmax=0.89 μg·ml-1,tmax=18.03 min; and for tablets of isoflavone aglycone:auc=36.01 μg·min·ml-1，cmax=0.41 μg·ml-1，tmax=31.43 min. the relative bioavailability of dripping pills and tablets was 128%. conclusion the pharmacokinetics of dripping pills and tablets of aglycone isoflavone were in accordance with single compartment model，and the relative bioavailability of dripping pills of aglycone isoflavone was higher.
key words:isoflavone aglycone drippping pills; isoflavone aglycone tablets; hplc; pharmacokinetics; relative bioavailability
异黄酮苷元(isoflavone aglycone)是一种来源于豆类植物的游离苷元，包括染料木素、黄豆苷元、黄豆黄素3种活性成分，其中染料木素的结构与雌二醇相似，且含量最高，生物活性最强[1]。异黄酮苷元是一种具有较强的抗氧化活性和神经保护作用的植物雌激素，在防治老年性痴呆和由于雌激素缺乏导致的骨质疏松等方面有良好的应用前景[2]。但异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低，影响了其在体内的生物活性。本实验通过考察自制异黄酮苷元滴丸[3]和片剂[4,5]的药代动力学特征，为异黄酮苷元滴丸的临床应用提供依据。
广东药学院学报 第25卷 第6期 杨红,等.异黄酮苷元滴丸和片剂在大鼠体内的相对生物利用度研究
1 材料与仪器
1.1 材料
异黄酮苷元滴丸和片剂是由本实验室从大豆中提取制备的游离苷元研制而成(平均丸重25.03 mg·丸-1，染料木素含量为133.2 mg·g-1;平均片重453.84 mg·片-1，染料木素含量为5.40 mg·g-1);染料木素对照品(上海同田生化技术有限公司);无水甲醇(分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司);磷酸(分析纯,沈阳 经济 技术开发区试剂厂);甲醇(色谱纯,tedia公司);异黄酮苷元滴丸灌胃液(精确称取0.05 g滴丸细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);异黄酮苷元片剂灌胃液(精确称取1.234 g片剂细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);其余试剂均为分析纯。
1.2 动物
sd大鼠36只，鼠龄8～12周，体质量(200±10)g，广州中医药大学实验动物中心，许可证号：scxk(粤)20080020，粤监证字2008a002。
1.3 仪器
p680a高效液相色谱仪(美国戴安公司);re52cs旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);低sh2d循环水试真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);数显恒温水浴锅(江苏省宏华仪器厂);xw80型旋涡混合器(上海第一医学院仪器厂);高速离心机(日本日立公司)。
2 实验方法
2.1 对照品溶液的制备
取空白血浆6份,分别精密加入染料木素对照品制得质量浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.60 μg·ml-1的对照品溶液，4 ℃保存备用。
2.2 色谱条件
参照 文献 [6,7]进行改进：色谱柱为diamonsil c18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);柱温为25 ℃;流动相为甲醇0.3%磷酸溶液(体积比48∶52);流速为0.7 ml·min-1;测定波长为254 nm;进样量为20 μl。
2.3 血浆样品预处理
取血浆1 ml， 加入1 ml乙酸乙酯， 涡旋振荡
2 min，3 000 r·min-1离心5 min，移取上层有机相于另一试管中;将下层溶液重复上述步骤，合并有机相溶液，通风橱中挥干，残留物加无水甲醇溶解，0.45 μm微孔滤膜过滤，用无水甲醇定容于2 ml容量瓶，得血浆样品溶液。
2.4 方法专属性
在“2.2”项色谱条件下，测得空白血浆、对照品血浆(含染料木素)、样品血浆(含异黄酮苷元)的色谱图见图1。从图1可见，血浆中的杂质不干扰测定。
2.5 标准曲线[8]
取“2.1”项下的对照品溶液，按“2.3”项下处理并进样测定，以染料木素溶液的质量浓度为横坐标,相对应的染料木素的峰面积为纵坐标,用最小二乘法进行线性回归 计算 ，得回归方程为y=3272.06 x-1.87，r=0.999 9。表明染料木素对照品的质量浓度在0.05～1.60 μg·ml-1(n=6)范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取空白血浆1.0 ml，按“2.3”项下处理，制得高、中、低3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的样品溶液，分别于1 d内和3 d内连续进样5次测定，并计算rsd值，结果见表1。表1 精密度试验结果
2.7 相对回收率试验
精密吸取血浆样品3份，按“2.3”项下操作处理，得血浆样品溶液并根据标准曲线计算样品溶液浓度，将所得浓度与实际浓度的比值即相对回收率，见表2。表2 相对回收率结果
2.8 稳定性考察
取“2.1”项下的3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样分析，结果显示溶液中染料木素的rsd为0.83%，表明样品溶液在4 ℃避光条件下12 h内稳定。
2.9 血浆样品测定
取sd大鼠36只，随机分成2组，隔夜禁食，分别灌胃给予异黄酮苷元滴丸灌胃液或异黄酮苷元片剂灌胃液(2 ml·只-1),于灌胃后0、5、10、15、30、45、60、75、90、105、120、150 min对大鼠进行眼眶取血(约1.5 ml·只-1)， 置肝素试管中抗凝， 5 000
r·min-1离心5 min，分离上清液，得血浆样品。按“2.3”项下方法处理得到血浆样品溶液并进行测定，利用回归方程求出血药浓度。
3 结 果
3.1 血药浓度测定结果
按不同时间点求出平均血药浓度，并绘制血药浓度-时间曲线，见图2、3。由图可见：15 min时滴丸的血药浓度为0.706 μg·ml-1，片剂的血药浓度为0.405 μg·ml-1，相比其他时间点，此采血点的血药浓度最高。
3.2 药动学参数
血药浓度数据经药代动力学软件3p87拟合处理后，药动学参数结果见表3。从表3可见：异黄酮苷元滴丸和片剂均符合一室模型;滴丸和片剂的主要药代动力学参数具有明显的差别，滴丸在18.03 min时达到血药浓度峰值0.89 μg·ml-1，而片剂出现2个峰值，分别在15 min和75 min，血药浓度峰值为0.41 μg·ml-1和0.365 μg·ml-1;滴丸的auc为46.30 μg·min·ml-1，而片剂的为36.01 μg·min·ml-1，滴丸的相对生物利用度约为片剂的128%。表3 异黄酮苷元滴丸和片剂药代动力学参数
4 讨 论
异黄酮苷元具有苯并吡喃酮结构，有较强的紫外吸收，3种活性成分均难溶于水[9]，影响了其在体内的吸收利用。本实验对自制异黄酮苷元滴丸和片剂的药代动力学特征和生物利用度考察，结果显示滴丸的血浆药物浓度-时间曲线为单峰，而片剂表现为双峰，说明片剂可能在大鼠体内存在肝肠循环;异黄酮苷元滴丸生物利用度为片剂的1.28倍，说明滴丸可显著改善和提高异黄酮苷元在体内吸收和代谢，在一定程度上解决了异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低的问题。本文结果为进一步的体内研究提供了依据。
【 参考 文献 】
【摘要】 目的 研究异黄酮苷元滴丸和片剂的药动学及相对生物利用度。方法 以sd大鼠为实验动物，采用高效液相色谱法测定异黄酮苷元滴丸和片剂单剂量灌胃给药后大鼠的血药浓度变化。用3p97软件进行药代动力学数据处理， 计算 分析药代动力学参数和相对生物利用度。结果 异黄酮苷元滴丸：auc为46.30 μg·min·ml-1，cmax为0.89 μg·ml-1，tmax为18.03 min;片剂：auc为36.01 μg·min·ml-1，cmax为0.41 μg·ml-1，tmax为31.43 min，滴丸相对于片剂的相对生物利用度为128%。结论 异黄酮苷元滴丸、片剂均符合一室模型，滴丸较片剂具有较高的生物利用度。本研究为异黄酮苷元滴丸研制提供了一定的依据。
【关键词】 异黄酮苷元滴丸;异黄酮苷元片剂;高效液相色谱法;药代动力学;相对生物利用度
abstract:objective to investigate the pharmacokinetic and relative bioavailability of isoflavone aglycone dripping pills and tablets in healthy sd rats,and evaluate the pharmacokinetic effects of the two dosage forms of isoflavone aglycone. methods 36 sd rats were intragastrically administered with the suspension solution of isoflavone aglycone dripping pills and tablets at single dose,and changes in plasma concentration were determined by hplc. pharmacokinetic data were processed with 3p97 software and the pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated. results for dripping pills of isoflavone aglycone:auc=46.30 μg·min·ml-1,cmax=0.89 μg·ml-1,tmax=18.03 min; and for tablets of isoflavone aglycone:auc=36.01 μg·min·ml-1，cmax=0.41 μg·ml-1，tmax=31.43 min. the relative bioavailability of dripping pills and tablets was 128%. conclusion the pharmacokinetics of dripping pills and tablets of aglycone isoflavone were in accordance with single compartment model，and the relative bioavailability of dripping pills of aglycone isoflavone was higher.
key words:isoflavone aglycone drippping pills; isoflavone aglycone tablets; hplc; pharmacokinetics; relative bioavailability
异黄酮苷元(isoflavone aglycone)是一种来源于豆类植物的游离苷元，包括染料木素、黄豆苷元、黄豆黄素3种活性成分，其中染料木素的结构与雌二醇相似，且含量最高，生物活性最强[1]。异黄酮苷元是一种具有较强的抗氧化活性和神经保护作用的植物雌激素，在防治老年性痴呆和由于雌激素缺乏导致的骨质疏松等方面有良好的应用前景[2]。但异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低，影响了其在体内的生物活性。本实验通过考察自制异黄酮苷元滴丸[3]和片剂[4,5]的药代动力学特征，为异黄酮苷元滴丸的临床应用提供依据。
广东药学院学报 第25卷 第6期 杨红,等.异黄酮苷元滴丸和片剂在大鼠体内的相对生物利用度研究
1 材料与仪器
1.1 材料
异黄酮苷元滴丸和片剂是由本实验室从大豆中提取制备的游离苷元研制而成(平均丸重25.03 mg·丸-1，染料木素含量为133.2 mg·g-1;平均片重453.84 mg·片-1，染料木素含量为5.40 mg·g-1);染料木素对照品(上海同田生化技术有限公司);无水甲醇(分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司);磷酸(分析纯,沈阳 经济 技术开发区试剂厂);甲醇(色谱纯,tedia公司);异黄酮苷元滴丸灌胃液(精确称取0.05 g滴丸细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);异黄酮苷元片剂灌胃液(精确称取1.234 剂细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);其余试剂均为分析纯。
1.2 动物
sd大鼠36只，鼠龄8～12周，体质量(200±10)g，广州中医药大学实验动物中心，许可证号：scxk(粤)2008?0020，粤监证字2008a002。
1.3 仪器
p680a高效液相色谱仪(美国戴安公司);re52cs旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);低sh2?d循环水试真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);数显恒温水浴锅(江苏省宏华仪器厂);xw?80型旋涡混合器(上海第一医学院仪器厂);高速离心机(日本日立公司)。
2 实验方法
2.1 对照品溶液的制备
取空白血浆6份,分别精密加入染料木素对照品制得质量浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.60 μg·ml-1的对照品溶液，4 ℃保存备用。
2.2 色谱条件
参照 文献 [6,7]进行改进：色谱柱为diamonsil c18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);柱温为25 ℃;流动相为甲醇?0.3%磷酸溶液(体积比48∶52);流速为0.7 ml·min-1;测定波长为254 nm;进样量为20 μl。
2.3 血浆样品预处理
取血浆1 ml， 加入1 ml乙酸乙酯， 涡旋振荡
2 min，3 000 r·min-1离心5 min，移取上层有机相于另一试管中;将下层溶液重复上述步骤，合并有机相溶液，通风橱中挥干，残留物加无水甲醇溶解，0.45 μm微孔滤膜过滤，用无水甲醇定容于2 ml容量瓶，得血浆样品溶液。
2.4 方法专属性
在“2.2”项色谱条件下，测得空白血浆、对照品血浆(含染料木素)、样品血浆(含异黄酮苷元)的色谱图见图1。从图1可见，血浆中的杂质不干扰测定。
2.5 标准曲线[8]
取“2.1”项下的对照品溶液，按“2.3”项下处理并进样测定，以染料木素溶液的质量浓度为横坐标,相对应的染料木素的峰面积为纵坐标,用最小二乘法进行线性回归 计算 ，得回归方程为y=3272.06 x-1.87，r=0.999 9。表明染料木素对照品的质量浓度在0.05～1.60 μg·ml-1(n=6)范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取空白血浆1.0 ml，按“2.3”项下处理，制得高、中、低3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的样品溶液，分别于1 d内和3 d内连续进样5次测定，并计算rsd值，结果见表1。表1 精密度试验结果
2.7 相对回收率试验
精密吸取血浆样品3份，按“2.3”项下操作处理，得血浆样品溶液并根据标准曲线计算样品溶液浓度，将所得浓度与实际浓度的比值即相对回收率，见表2。表2 相对回收率结果
2.8 稳定性考察
取“2.1”项下的3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样分析，结果显示溶液中染料木素的rsd为0.83%，表明样品溶液在4 ℃避光条件下12 h内稳定。
2.9 血浆样品测定
取sd大鼠36只，随机分成2组，隔夜禁食，分别灌胃给予异黄酮苷元滴丸灌胃液或异黄酮苷元片剂灌胃液(2 ml·只-1),于灌胃后0、5、10、15、30、45、60、75、90、105、120、150 min对大鼠进行眼眶取血(约1.5 ml·只-1)， 置肝素试管中抗凝， 5 000
r·min-1离心5 min，分离上清液，得血浆样品。按“2.3”项下方法处理得到血浆样品溶液并进行测定，利用回归方程求出血药浓度。
3 结 果
3.1 血药浓度测定结果
按不同时间点求出平均血药浓度，并绘制血药浓度-时间曲线，见图2、3。由图可见：15 min时滴丸的血药浓度为0.706 μg·ml-1，片剂的血药浓度为0.405 μg·ml-1，相比其他时间点，此采血点的血药浓度最高。
3.2 药动学参数
血药浓度数据经药代动力学软件3p87拟合处理后，药动学参数结果见表3。从表3可见：异黄酮苷元滴丸和片剂均符合一室模型;滴丸和片剂的主要药代动力学参数具有明显的差别，滴丸在18.03 min时达到血药浓度峰值0.89 μg·ml-1，而片剂出现2个峰值，分别在15 min和75 min，血药浓度峰值为0.41 μg·ml-1和0.365 μg·ml-1;滴丸的auc为46.30 μg·min·ml-1，而片剂的为36.01 μg·min·ml-1，滴丸的相对生物利用度约为片剂的128%。表3 异黄酮苷元滴丸和片剂药代动力学参数
4 讨 论
异黄酮苷元具有苯并吡喃酮结构，有较强的紫外吸收，3种活性成分均难溶于水[9]，影响了其在体内的吸收利用。本实验对自制异黄酮苷元滴丸和片剂的药代动力学特征和生物利用度考察，结果显示滴丸的血浆药物浓度-时间曲线为单峰，而片剂表现为双峰，说明片剂可能在大鼠体内存在肝肠循环;异黄酮苷元滴丸生物利用度为片剂的1.28倍，说明滴丸可显著改善和提高异黄酮苷元在体内吸收和代谢，在一定程度上解决了异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低的问题。本文结果为进一步的体内研究提供了依据。
【 参考 文献 】
关键词:运动性贫血;Fe;Zn;Ca
中图分类号:G804.7 文献标识码:A 文章编 号:1007-3612(2010)09-0066-04
The Effect of Sports Anemia on Fe、Zn、Ca in Rats’ Serum
ZHANG Xiaoli
(Luoyang Institute of Science and Technology, Luoyang 471023, H enan China)
Abstract:objective:The purpose of this research was to monitor and evalu ate the dynamic changes ofthese three elements(Fe, Zn and Ca)periodically by building an animal model ofsports anemia. The paper studies the regularity of the changes to provide refe rence for the diagnoses of sports anemia in the future and propose suggestions f or the athletes to supply some nutrient elements in the time during longterm e xhaustive training. Results: by comparing with the control group, the paper fou nd that the trend of Fe, Zn and Ca in serum of rats had respective characteristi cs: Fe in serum of rats in the sports anemia group and the control group increas ed obviously, but Fe in serum of rats in the sports anemia group was less obviou sly compared with control group, while Zn and Ca have no significant changes.
Key words: sports anemia; Fe; Zn; Ca
运动性贫血的概念是1959年由日本学者Yochimura首先提出,是指贫血的发生与运动训 练有密切关系或直接由运动训练造成的一种特殊贫血,是由于机体无法适应长时间大强度运 动而引起血红蛋白浓度下降从而导致机体一系列生理、病理变化[1,2]。本研究采 用长期递 增负荷训练建立运动性贫血大鼠模型,通过对比观察造模组和对照组中大鼠血清中Fe、Zn、 Ca三种元素变化趋势和规律,为今后进一步研究长期运动对运动员血液三种元素含量的影响 提供参考,为运动员合理补充微量元素提供科学依据。
1 研究对象与方法
1.1 研究对象 雄性Wistar大鼠16只,体重(199±10)g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物 许可证号:SCXK(京)2007-0001,动物级别:SPF级。随机分为对照组(8只)和递增负荷 跑台造模组(简称造模组,8只)。动物饲养环境温度(23±2)℃,湿度40%～60%。分笼饲养 , 每笼4只,自由饮食,自然节律光照。动物饲料为全价营养颗粒饲料,购于北京科澳协力饲 料有限公司,产品许可证号:SCXK(京)2005-0007,铁含量>100 mg/1 000 g。
1.2 实验方案
1.2.1 造模方案 造模组的运动方案依据赵杰修、曹建民等应用的运动性贫血动物模型的建立方法[1,3 ] 。造模组进行递增负荷跑台训练(BCPT-202型)5周,动物跑台坡度为0°,跑台速度为30 m /min,每周训练6天。前2周每天进行1次训练,其余时间为每天上、下午各训练一次,每周 休息一天。运动性贫血模型建立的训练安排计划为:第1次训练时间为1 min,之后以2 min /次的频率进行递增,最后一次的训练时间为95 min;若训练中大鼠出现严重力竭症状(连 续施加机械刺激,大鼠不能继续跑、下跑台后腹部触地严重呈“甲鱼状”),允许其休息3- 5 min。运动组跑台训练安排详情见表1。
1.2.2 取样及测试方法 外周血测试:实验大鼠在正式实验开始前24 h、建模期最后一次训练结束后24 h,内眦取血 20 μL,采用日本光电工业株式会社生产的MEK-6318K血
投稿日期:2009-12-30
作者简介:张笑莉,副教授,研究方向运动人体科学。
球计数仪测定红细胞数(RBC)、血红蛋白(Hb)和红细胞压积(Hct)等指标。
血液中三种微量元素的测试:实验大鼠在测定血象指标取血样的同时,取40 μL血液,加入 到MB5稀释液(生产批号:3301060721)中,采用 MB5多元素血液分析仪(北京普析通用仪 器有限责任公司)测定。
1.3 数理统计 数据采用SPSS13.0统计软件包进行统计学处理,选用配对T检验对造模组及对照组造模 前后各指标进行统计处理,采用独立样本T检验对造模前及造模后造模组和对照组各指标进 行统计处理(P
2 结 果
2.1 造模期大鼠体重、RBC、Hb、Hct的变化 5周的递增负荷跑台运动后,造模组大鼠体重较对照组大鼠的体重出现显著的下降(对 照组(405.7±21.04)g,造模组(301.0±24.80)g,p
2.2 运动贫血对大鼠血液中Fe、Zn、Ca元素变化的影响 运动性贫血造模过程中,对照组和造模组血液Fe浓度均有明显上升趋势,但造模前后对 照组、造模组组间均无显著差异;对照组、造模组大鼠血液中Zn和Ca浓度造模前后没有明显 改变(表3)。
3.1 大鼠外周血液RBC、Hb、Hct的变化 运动性贫血动物模型的建立是进行运动性贫血机制研究的关键环节。自从运动性贫血概 念提出,国内外学者就展开了建立运动性贫血动物模型的研究[1-6]。运动性贫血 原因极其 复杂,运动性贫血的动物模型迄今为止尚没有一致认可的模型建立。在已有的动物模型中 [ 1-6],运动方式多为游泳、跑台运动,动物多为大鼠。贫血模型成功建立的重要标准为 贫血 动物的Hb、RBC、Hct较对照动物显著降低[1,3,7]。本研究中运动性贫血动物大鼠 模型采用 赵杰修、曹建民等[1,3]建立的运动性贫血大鼠模型的建立方法,五周的递增负荷 跑台运 动使建模组的RBC、Hb和Hct由运动开始前的(8.41±0.59)1012/L、(152.91± 8 .90)g/L和(43.16±3.22)L/L下降到建模结束时的(6.89±0.76)(1012/L)、(1 36.12±15.65)g/L和(37.24±5.01)L/L(p
3.2 运动贫血对大鼠血液中Fe含量的影响 铁是人体内含量丰富的必需金属元素,也是运动性贫血领域研究最多的微量元素之一。 铁参与血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素氧化酶、过氧化物酶及触酶的合成,并与乙酰辅酶A 、琥珀酸脱氢酶及细胞色素还原酶的活性密切相关,是维持人体各种正常生理功能所不可缺 少的物质。一般正常成人体内铁的总含量为3～5 g,其中,60%～70%是以血红蛋白(Hb)的
形式存在于血液中,可作为O2的运输载体;3%的铁以肌红蛋白(Mb)的形式贮存在肌细胞 中;26%～36%的铁以铁蛋白或含铁血黄素的形式储存于肝、脾、骨髓等组织中;还有一些 铁存在于电子传递链的细胞色素酶中,参与ATP的形成。铁的缺失可直接影响O2的运输和 肌肉有氧氧化能力及ATP的形成,导致机体缺氧,脑细胞缺氧,导致头晕眼花,注意力不集 中;肌细胞缺氧,导致全身乏力,进而影响运动能力和技术水平的正常发挥[8,9] 。
一般认为,运动性贫血可能发生的机理包括:血液稀释、血管内溶血、女性运动员的月 经紊乱及膳食结构和饮食方法的不合理等,目前尚无定论[1]。血液稀释,是运动 时使血浆 容量增加,从而导致单位容积中的血红蛋白和红细胞相对减少。血容量增加的程度和运动强 度、运动量密切相关。因此,优秀耐力运动员的血容量增加更加明显[2]。一般认 为,高血 浆容量反应,血红蛋白、红细胞压积浓度相对下降是机体适应性发挥、动员的表现,其可刺 激、动员红细胞生成素系统,同时还可降低血液粘滞度,减少外周阻力,利于血液的灌流和 氧的输送[10]。对于这种血液中红细胞相对值减少而绝对值未减少的现象,称为“ 假性运动性贫血”或“暂时性贫血”。
本研究中,运动性贫血造模成功后,对照组和造模组Fe含量均有有显著性提高,区别在 于对照组大鼠血液Fe元素出现了非常显著的提高,造模前后对照组与贫血组皆无显著差异( 表3)。这与实验预计的结果具有很大的差异,运动性贫血造模成功后,Fe元素含量不降 反升,分析其主要原因:第一,5周的递增负荷跑台运动刺激使造模组大鼠的血浆容量反应 ,血红蛋白、红细胞压积浓度出现相对降低,出现“暂时性运动贫血”,即血液稀释,但造 成的贫血对单位血液中Fe元素的含量没有明显影响;第二,据表3可知,对照组5周后Fe元素 的含量有非常显著性提高,这说明大鼠血液中Fe元素的含量随周龄增加而增加,而5周的递 增负荷跑台运动刺激并不能使造模组大鼠血液中Fe元素的含量较造模前出现明显下降。
实验结果显示造模组大鼠血液Fe元素含量在5周的递增负荷跑台运动的刺激下只出现明 显增加,而对照组出现非常显著增加,表明造模组大鼠Fe元素含量相对有所下降。因此,运 动性贫血仍将一定程度上影响血液中Fe元素的含量,影响运动能力和技术水平的发挥,长期 运动训练期间及时补充Fe仍是十分必要的。
3.3 运动贫血对大鼠血液中Zn含量的影响 锌广泛存在于机体各种脏器中,参与组织、细胞和生物分子的构成,是人体必需的微量 元素。锌是脑组织含量最高的微量元素,能抑制r-氨基丁酸合成酶的作用。缺锌早期表现是 味觉减退、食欲下降,导致学习记忆力下降、伤口不易愈合、生殖器官发育受损等现象。锌 是很多酶的组成成分,与酶的活性密切有关。锌具有抑制脂质过氧化、抗自由基损伤的作用 。近年来有研究表明[8],运动训练可致自由基生成增加,而锌通过不同途径在抗 自由基损 伤中发挥作用。不同的锌含量水平对机体清除自由基的能力是不同的。过多或过少的锌含量 均不能最大程度发挥锌的积极作用。另有实验表明[9],锌与骨骼肌正常功能和疲 劳能力有 关。运动引起锌变化的原因是:剧烈持续性耐力运动一开始引起血浆和血清锌浓度的升高, 可能与骨骼肌蛋白分解、锌从肌肉转移到细胞外液有关。运动后的短时期内,血浆锌浓度下 降,可能是由于尿排出的锌增加和锌从血浆到肝脏的转移。软组织损伤也会降低血浆锌浓度 。短时间运动中,血清锌显著升高。耐力活动中,血清锌稍升高,在第二日可恢复到运动前 水平。
结果显示,造模过程中对照组大鼠血液中Zn变化没有显著差别(P>0.05),运动贫血造 模 组大鼠血液中Zn也无显著变化。造模前后对照组与贫血组皆无显著差异(P>0.05)。 本 实验结果表明血液中Zn浓度的变化与运动性贫血没有明显关联。也就是说,出现运动性贫血 不能使血液中Zn含量出现明显变化。与本研究结果相似的是,李晓新等认为[11], 在潜在性缺铁性贫血的运动员中,与造血无关的微量元素Zn在正常范围。
3.4 运动贫血对大鼠血液中Ca含量的影响 钙在维持身体结构和细胞功能方面发挥着重要作用,几乎体内的各种细胞功能均与钙离子( Ca2+)调节有关,细胞Ca2+代谢异常会引起机体各种功能障碍[12]。 钙是骨盐的主要 成分,Ca2+具有维持神经肌肉正常兴奋性、降低神经肌肉的应激性、参与肌肉收缩、 降低毛细血管及细胞膜通透性的作用,同时是细胞信息传递的第二信使[13]。竞技 运动员在 运动训练和比赛中需要很高的灵敏素质、反应速度、心脏泵血能力和肌肉力量。这些运动能 力的提高都与钙离子的存在有十分重要的关系。而运动员在训练比赛中钙离子丢失非常大, 因此高钙摄入对运动能力保持和提高有积极意义。
目前关于钙摄入量与运动能力关系的直接研究报道并不多。但许多研究发现,自一定运 动强度开始起,血钙浓度上升持续到运动终止。运动停止后,血钙逐渐下降至低于安静值再 恢复[14]。运动停止后24 h,组织间质钙上升,肌浆钙、线粒体钙也上升,三个环 境中的钙 在一段时间内同时上升,说明动员的钙量很大[15]。随着钙量需求增加,肌细胞游 离钙浓度 下降时,肌球蛋白ATP酶活性会下降,肌肉收缩力下降,因而运动后应注意钙的补充。有研 究发现,适宜的高钙摄入对运动小鼠的运动能力提高、运动后内环境稳态的恢复和亚细胞结 构与功能的保护,都具有明显促进作用[16]。
本研究结果中,运动性贫血造模过程中,贫血造模组血液Ca浓度增高,但是不具有显著 性差异。增高的原因是运动开始起,动员的钙量增加,血钙浓度有上升持续到运动终止。另 外,运动停止后24 h,组织间质钙上升,肌浆钙、线粒体钙也上升,三个环境中的钙在一段 时间内同时上升,之后逐渐下降。本次采血是在建模结束后24 h,因而出现Ca含量的上升, 但没有显著性差异。
4 结 论
五周的递增负荷跑台运动,成功建立运动性贫血动物模型。运动性贫血造模过程中,贫 血造模组和对照组大鼠血液Fe浓度随周龄增长较造模前显著性升高,但造模组大鼠Fe单位含 量相对对照组有所降低,另外运动性贫血不能使血液中Zn、Ca含量出现明显变化。因此,长 期运动训练期间及时补充Fe仍是十分必要的。
参考文献:
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【关键词】血液常规检验；不合格标本；原因分析
【中图分类号】R-1 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2016）03-0167-01
目前，全自动血液分析仪在临床血液检验中获得广泛的应用，有效地提高血液检测的准确度和可靠性，为临床诊治提供更加有力的参考依据。然而，由于种种因素导致血液标本的质量受到影响，进而对血液检验的准确度产生不良的影响。在本文中主要通过对我院血常规检验不合格的血液标本进行回顾性分析，探讨其不合格的原因。
1资料与方法
1.1一般资料
选择我院血液检验科2013年1月-2015年1月临床血常规检验不合格的标本作为研究对象，一共80份，对其不合格的原因进行分析。
1.2检验方法
1.2.1检验仪器和试剂
采用全自动血细胞分析仪（产自于日本东芝，型号：40-RF）进行检验，试剂来自于北京首都医院，采用KDTA-K2抗凝静脉血进行检验。
1.2.2采集标本
清晨采集空腹经肘静脉血，量约为5ml， 进行离心处理，进行检验。
1.3统计学方法
采用SPSS19.0统计学软件进行分析，对正态分布的数据样本进行t检验，对非正态分布的数据进行卡方检验，n表示病例数，采用平均数±标准差的形式表示数据分布的趋势，P
2结果
2.1血液采集部位与医院检验结果之间的关系
异侧采集血液标本值：钾元素是3.87mmol/L，钠元素是140.10mmol/L，氯元素是96.05mmol/L，肌酐是132.12mmol/L，尿酸是115.80mmol/L，葡萄糖是12.05mmol/L；
同侧采集血液标本值：钾元素是2.87mmol/L，钠元素是180.10mmol/L，氯元素是66.05mmol/L，肌酐是105.12mmol/L，尿酸是295.80mmol/L，葡萄糖是40.05mmol/L。
以上两组数据之间的比较差异具有统计学上的意义（P
2.2溶血标本与正常标本结果的对比：
正常标本参考值是：钾元素是4.2mmol/L，钠元素是138mmol/L，氯元素是100mmol/L，肌酐是42.5mmol/L，尿酸是198.5mmol/L，胆红素是5mmol/L；
溶血标本平均值是：钾元素是8.5mmol/L，钠元素是132.5mmol/L，氯元素是108.5mmol/L，肌酐是85.6mmol/L，尿酸是105.5mmol/L，胆红素是19mmol/L。
以上两组数据之间的比较差异具有统计学上的意义（P
2.3血液送检时间与医院检验结果的相关性：
正常的送检结果参考值：ALT是67.5U/L，AST是25.5U/L，GLU是6mmol/L，LDH是200.5U/L，CK是170.5U/L；
1小时后送检的检验平均值：ALT是62.5U/L，AST是20.5U/L，GLU是5mmol/L，LDH是245.5U/L，CK是145.5U/L。
以上两组数据之间的比较差异具有统计学上的意义（P
3讨论
3.1采集时间
通常，采集血液的时间在早晨空腹的时间段抽取静脉血，那么医院检验结果的准确性是最高的，但是空腹时间过长就会对检验结果产生影响，如果空腹时间达到甚至超过了48小时，那么血液中的清胆红素会翻倍增加，血糖水平会因长时间的空腹而大幅度降低，其他的血压成分也因空腹时间过长而发生明显地改变。另一方面，酒精的摄入也会导致血液成分的标本值增加，例如血浆乳酸以及乙酸盐等等。除了空腹时间和酒精的摄入会对血液成分有所影响之外，如果病患者使用过抗生素或者接受过输液，那么应当在使用抗生素之前以及接受输液完毕后的两个小时之后，方可进行血液采集检验，对于为重病患者或者低血钾的病患者，血液采集时间最佳好实在餐后的时间段。
3.2采集部位
为了减轻病患者的痛苦，在临床实践上，护士通常会直接从原本的输液通路中、同一侧的部位血管进行血液采集，但是这样所采集的血液会因为有其他液体的摄入而有所稀释，所以，应当从不同测的部位进行血液采集，并且应当避免在静脉输液后的枕头进行血液采集。
3.3标本溶血
溶血会使得血清检测值明显的增高，红细胞内含量过低也会稀释血清，降低检验结果，因此如果出现溶血的情况应当重新采集血液进行检验。
3.4标本送检时间
血液采集完毕之后送去检验的时间应当在采集血液后的15分钟之内，与此同时，进行抽取血样、递送以及检测的时候必须要求在隔绝空气的情况下进行。
综上所述，临床血液常规检验不合格标本的原因涉及到标本采集的时间、采集的部位、标本溶血的发生、送检的时间等等方面，必须采用有针对性的措施加强对血液标本的管理，从而保证血液检验的准确度。
参考文献
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【摘要】 通过乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase， LDH）的检测，观察解毒通络药物干预后的脑微血管内皮细胞条件培养液（ conditioned medium of cerebral microvascular endothelial cells， CMECs-CM）特征及其抗缺血及再灌皮质神经元损伤的效应，探讨脑微血管内皮细胞（cerebral microvascular endothelial cells， CMECs）调控神经元功能的机制。方法:通络救脑注射液（Tongluo Jiunao Injection， TLJNI）作用于正常、缺血和缺血再灌三种培养状态的大鼠CMECs，分别收集有药物干预及无干预的三对无血清内皮细胞条件培养液，并测定其LDH值。同步原代培养大鼠脑皮质神经元，亦分为正常、缺血、缺血再灌三组，用低（10%）、中（50%）、高（100%）三种浓度的各类CMECs-CM分别作用上述三种培养状态的神经元，测定其LDH漏出率。结果:比较TLJNI干预后的CMECs-CM与无干预的CMECs-CM中LDH漏出值，CMECs缺血组与缺血再灌组经药物干预后均明显降低（ P <0.01）。对于缺血神经元，缺血内皮细胞条件培养液（conditioned medi-um of ischemic CMECs， Is-CM）高浓度（100%）和TLJNI干预后的缺血内皮细胞条件培养液（conditioned medium of ischemic CMECs with drug treatment， IsT-CM）高浓度（100%）作用后表现为增加LDH漏出率（ P <0.01），而低浓度10%的IsT-CM则降低LDH漏出率（ P <0.05 ）;对于缺血再灌神经元，与对照组比较，各类CMECs-CM作用后均能降低神经元LDH漏出率（ P <0.05 或 P <0.01）。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异，均以10%或50%的CM降低损伤为佳，正常内皮细胞条件培养液（conditioned medium of normal CMECs， N-CM）及缺血再灌内皮细胞条件培养液（conditioned medium of ischemic/reperfusional CMECs， Rp-CM）组间差异有统计学意义（ P <0.05或 P <0.01 ）;对于正常神经元，各类CMECs-CM作用后均增加了神经元LDH漏出率（ P <0.05或 P <0.01 ）。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异，N-CM组间差异有统计学意义（ P <0.05或 P <0.01 ）。结论:TLJNI能够防御CMECs缺血及缺血再灌的损伤，可以通过内皮细胞介导发挥抗缺血及缺血再灌神经元损伤的效应。提示CMECs-CM及TLJNI干预后的CMECs-CM均存在着抗缺血再灌神经元损伤的活性物质。
【关键词】 脑微血管内皮细胞; 神经元; 脑缺血; 大鼠; 中药
近年来中药调节脑微血管内皮的研究日益受到人们的重视［1～3］，但整体动物实验无法将内皮细胞与脑细胞分离开来进行研究，本实验室采用大鼠大脑皮质微血管内皮细胞和神经元分离纯化培养的方法，可使其纯度分别达到98%，是研究二者之间关系的一种可靠的实验方法。通络救脑注射液（Tongluo Jiunao Injection， TLJNI）是治疗缺血性脑病的中药新药。初步实验证实，TNJNI在缺血内皮细胞损伤状态下具有可靠的维护脑微血管内皮功能的作用［4，5］。这种对脑微血管内皮细胞（cerebral microvascular endothelial cells， CMECs）的保护作用是否启动进一步的脑保护效应有待探知。本实验通过观察CMECs缺血损伤及通络救脑注射液干预后的不同条件培养液（conditioned medium， CM）抗缺血神经元损伤的效应，探讨CMECs与神经元的功能联系，并进一步阐明通络救脑注射液的“解毒通络”作用机制，对于深化“毒损脑络”病机［6］的生物学理论内涵具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 动物 雄性SD大鼠18只，体质量 60～80 g ，用于同一批CMECs原代培养。新生SD大鼠（24 h内）4只，用于同一批原代神经元培养。动物合格证号为SCXK京2002-0003，清洁级，购自北京维通利华实验动物中心。
1.1.2 药物 通络救脑注射液，批号为04061011，购自内蒙古康源药业有限公司。 药物组成为栀子和三七，提取分离有效成分栀子苷和三七总皂苷，配伍制成注射液，该注射液含原药有效成份为 7.7 mg/ml。
1.2 实验方法 通过乳酸脱氢酶（lactate dehydro-genase， LDH）的检测，观察正常、缺血及缺血再灌不同状态的脑微血管内皮细胞条件培养液（condi-tioned medium of cerebral microvascular endotheli-al cells， CMECs-CM）和 TLJNI干预后的CMECs-CM抗缺血及缺血再灌皮质神经元损伤的特征效应。
1.2.1 解毒通络药物干预后的CMECs-CM的收集
世界上竟有蓝色人种？考察队员们简直不敢相信，他们怀疑是不是这些人的身上涂抹了什么东西才使他们变蓝的。于是，他们决定作进一步的调查看究竟如何。经过几天的努力，他们终于发现了这些蓝色皮肤的人，竟是一个庞大的家族，居住在洞穴之中，过着狩（shòu）猎的原始生活。他们又发现这些奇特的人皮肤不但是蓝色的，而且连血液也都是蓝色的。
在这一奇特的发现之后不久，美国加利福尼亚大学医院的著名运动生理专家韦西，在智利的奥坎基尔查峰海拔6000多米的高处，也发现了适应力极强的浑身皮肤发着蓝色光的人种。韦西说在这样高的山峰上，空气十分稀薄，含氧量很少，这些奇特的蓝色人，像机灵的猴子一样，行动特别敏捷，令人难以与其相比。
另外据说在非洲撒哈拉沙漠中，也生活着一批为数不多的蓝色人。一位美国生物学家在考察喜马拉雅山时，也曾在6千米以上发现了一些蓝色皮肤的僧侣，最令人吃惊的是，这些蓝色的僧侣，在这空气十分少的高山上竟然谈笑自若，还能干笨重的体力活。
这一系列蓝种人的发现，向人们关于人种的划分提出了挑战，用事实说明在地球上除了黄、白、黑、棕这四个人种之外，蓝色人种也该占有一点位置了。然而更令人奇怪的是，在世界上黄、白、黑、棕这四种人，无论其肤色如何，其血液都是鲜红色的，而这蓝色人的血为什么会与他们的皮肤相同呈蓝色呢？
对这个奇怪的现象科学家们做了旷（kuàn）日持久的研究，提出了不同的见解。一种看法是，皮肤的颜色和血液的成分关系密切。红色的血液是由于血液中红细胞中含有一种叫血红蛋白的红色蛋白质，因而使血液呈现红色。而蓝色人的血液中有一种“超高血型蛋白”，却缺乏一种控制这种蛋白增长的酶，所以他们的血液呈蓝色，致使皮肤也呈蓝色。
另一种看法认为蓝血人是一种病理状态，在他们血液中某些化学成分发生了异常变化，这种变化很可能是由于某种“特殊病态基因”造成的。
一些美国科学家提出：在血细胞内，血红蛋白负责输送氧气，当氧气充足时，血红蛋白会呈现红色，所以常人血液皆为红色；当缺乏氧气时，血红蛋白就会呈蓝色。蓝色人全身蓝色，可能就是高山缺氧所致。他们在研究中发现，蓝种人的血液中血红素大大超过了正常人。这大概就是他们能适应高山缺氧环境的原因。
还有一些科学家从某些具有蓝色血液的动物身上得到了启发，他们指出在海洋中，有一种大王乌贼和马蹄蟹血液是蓝色的，海蛸（xiāo）和墨鱼血液却是绿色的。可见，血液的颜色是由血色蛋白含有的元素决定的。含铜元素叫血蓝蛋白使血液呈蓝色；含钡（bèi）元素叫血绿蛋白，使血液呈绿色；含铁元素叫血红蛋白，使血液呈红色。从这一理论出发，他们认为蓝色人的形成可能是血液中缺乏铁元素而铜元素过多造成的。
