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巢式PCR早期检测实验大鼠卡氏肺孢子虫

作者:张小娟; 杨芳芳; 欧阳颐; 王鸽; 黎学铭; 林睿 广西医科大学病原生物学教研室; 南宁530021; 广西疾病预防控制中心; 南宁530028

摘要:目的探讨ITS1-5.8S rRNA—ITS2巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性及早期检测的评估。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫,大鼠分为7组,6组实验组和1组对照组,每组10只,实验组采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫,对照组则不予激素处理。自诱导开始第3周至第8周每周收集1组实验组大鼠肺组织(1ungtissue,LT)和支气管肺泡灌洗液(bronchoal veolar lavage fluid,BALF)标本,采用ITSl-5.8SrRNA—ITS2巢式PCR法扩增卡氏肺孢子虫ITSI-5.8SrRNA—ITS2,同时采用六亚甲基四胺银(GMS)染色镜检法对第3周到第8周的大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,并将两种方法进行比较以评估巢式PCR技术的敏感性。结果采用ITSI-5,8SrRNA—ITS2巢式PCR法对实验感染卡氏肺孢子虫的大鼠¨和BALF进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率依次为第3周20%(2/10)、0(0/10),第4周70%(7/10)、10%(1/10),第5周90%(9/10)、30%(3/10),第6周90%(9/10)、80%(8/10),第7周100%(10/10)、80%(8/10),第8周63%(5/8)、63%(5/8)。而GMS染色镜检法仅于第5周开始检出卡氏肺孢子虫包囊,第6、7周包囊数最多。实验组大鼠诱导后的前4周无明显卡氏肺孢子虫肺炎体征,第5周后症状趋于明显。结论ITSI-5.8SrRNA-ITS2巢式PCR法敏感性高,可在第3周后和无症状阶段实验大鼠中检出卡氏肺孢子虫,并且比镜检法早两周。

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