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RNAi对波动性葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞糖原合成酶激酶-3β、β-联蛋白作用的研究

作者:梁继兴; 李连涛; 陈彦; 游婷婷; 陈玉芳; 沈小燕; 林丽香 福建省立医院内分泌科; 福州350001; 福建医科大学省立临床医学院; 福州350001

摘要:目的 构建糖原合成酶激酶 -3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β) 特异的RNAi 腺病毒表达载体,感染原代人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),观察其对波动性浓度葡萄糖溶液诱导的 HUVEC Wnt 信号通路中 GSK-3β、 β- 联蛋白(β-catenin)的影响. 方法 设计合成针对GSK-3β mRNA不同位点的短发荚RNA (short hairpin RNA, shRNA)编码序列,重组 RNAi 腺病毒表达载体.实验分为3组,空白对照组、阴性对照组、实验组.空白对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液(5.5 mmol/L 和 30.5 mmol/L两种浓度的葡萄糖溶液每日交替培养,模拟血液中葡萄糖浓度的波动)培养 HUVEC;阴性对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养 HUVEC,并使用无携带 GSK-3β 基因的腺病毒感染培养的 HUVEC ;实验组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养 HUVEC,并 GSK-3β特异的RNAi 腺病毒感染培养的 HUVEC.Western 印迹法波动性浓度葡萄糖溶液干预前及干预后 72 小时 3 组的 GSK-3β、β- 联蛋白水平.结果 波动性浓度葡萄糖溶液干预 72 小时后,实验组的 GSK-3β 表达水平(0.1068±0.0034)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F =10886.388, P =0.000);实验组的 β- 联蛋白水平表达水平(0.6653±0.0167)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F =315.96, P =0.000) .结论 构建的RNAi腺病毒感染 HUVEC 后可以抑制高糖诱发的 GSK-3β 蛋白表达、增加细胞内 β- 联蛋白的蛋白水平.

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