适于基因组测序的高质量桃线粒体DNA的高效提取方法

摘要：高质量线粒体DNA(mtDNA)是线粒体基因组测序及序列分析的重要前提。为获得高质量桃mtDNA,以‘21世纪’桃叶片为外植体,24℃完全避光条件下进行愈伤组织诱导及增殖。对获得的愈伤组织进行匀浆化处理,结合差速离心、蔗糖衬垫和SDS裂解等方法提取并纯化线粒体。结果表明:MS培养基添加3.0 mg·L-1 6-BA和1.0 mg·L-1 2,4-D可高效诱导并增殖桃叶片愈伤组织,诱导率可达到100%。荧光显微镜检测显示纯化后的线粒体完整且具有活性。提取mtDNA的产率为13.10μg·g-1,无RNA和蛋白质等其它杂质污染。mtDNA电泳检测条带大小约为23 kb,无降解。特异性基因PCR检测表明获得的mtDNA不存在核DNA和叶绿体DNA污染,其纯度可满足后续分子生物学试验及高通量基因组测序的要求。该研究建立了一个适合桃mtDNA快速高效提取方法,为后续相关分子生物学研究提供了参考依据。